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[求助] western問(wèn)題求救�。�！

western轉(zhuǎn)膜后，100V,1h20min，轉(zhuǎn)膜時(shí)，溫度很高，聽(tīng)見(jiàn)周?chē)谋诨穆曇�，電流一開(kāi)始就300mA，最后貌似升到1000多mA，也不知道是哪里出錯(cuò)了導(dǎo)致這么發(fā)熱，轉(zhuǎn)膜液最后變成黃色（見(jiàn)圖），膠也變黃了，但膜上的marker很明顯（見(jiàn)圖），我用TBST洗了膜2次，每次5min，聽(tīng)說(shuō)蛋白在高溫下會(huì)降解，請(qǐng)問(wèn)還有做下去的必要嗎？那么出現(xiàn)這個(gè)是什么原因？

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1樓 2013-02-04 09:34:51

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cicelyzh

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wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-02-06 07:34:45

照片上感覺(jué)是挺夸張的。你可以用麗春紅染一下膜看看。如果還可以就繼續(xù)做。

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2樓2013-02-05 07:26:32

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遙控器68

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嚴(yán)重懷疑問(wèn)題出在你的電泳槽身上，電流也太大了，會(huì)不會(huì)燒到什么東西了？
緩沖液顏色不正常，你洗槽的時(shí)候是不是直接把導(dǎo)電的部分一起弄到水里了？因?yàn)榈谝谎劬陀锌吹借F銹的趕腳……

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3樓2013-02-05 10:18:11

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a83875785

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-05 08:26:32
照片上感覺(jué)是挺夸張的。你可以用麗春紅染一下膜看看。如果還可以就繼續(xù)做。

做完了還顯色了一張膜大概廢了一半吧沒(méi)有全部廢掉底下的小蛋白能檢測(cè)到上面大蛋白貌似都降解了

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4樓2013-02-05 19:44:38

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 遙控器68 at 2013-02-05 11:18:11
嚴(yán)重懷疑問(wèn)題出在你的電泳槽身上，電流也太大了，會(huì)不會(huì)燒到什么東西了？
緩沖液顏色不正常，你洗槽的時(shí)候是不是直接把導(dǎo)電的部分一起弄到水里了？因?yàn)榈谝谎劬陀锌吹借F銹的趕腳……

洗槽的時(shí)候那個(gè)一黑一紅的轉(zhuǎn)膜槽是直接放水龍頭下沖的

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5樓2013-02-05 19:45:32

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好恐怖��！從沒(méi)遇到這種情況，我電流最大也就250ma，兩個(gè)半小時(shí)，轉(zhuǎn)170KD左右的蛋白，你是多大的蛋白？怎么那么大電流，對(duì)儀器也不好��！感覺(jué)都要短路了似的，溫度這么高，大蛋白或許真的降解了。

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人有絕交，才有至交！

6樓2013-02-05 23:45:30

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snailtt

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好恐怖，下回用橫流300mA吧，這次的不行就算了，就算出了結(jié)果你敢用嗎
另電轉(zhuǎn)液全部倒掉重配看看

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7樓2013-02-06 17:46:48

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david0308

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wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-02-14 05:42:15

樓主的轉(zhuǎn)膜槽子檢查過(guò)了么？怎么看描述像是電源短路……

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]

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哈哈

8樓2013-02-14 01:09:05

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robustli

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我的濕轉(zhuǎn)方法，80V，45min，即使是440KD的蛋白都能轉(zhuǎn)過(guò)去。

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immunologyparasite

9樓2013-02-16 01:54:42

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1 check your transfer buffer(1X?);
2 check your machine.
3 from the marker ,it seems you can keep going.

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有朋自網(wǎng)上來(lái)不亦樂(lè)乎

10樓2013-02-17 19:44:31

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