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guyue900905新蟲 (初入文壇)
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[求助]
什么樣地結(jié)果算是pcr后p出來了，謝謝~~~~~
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| 我提取的動物肌肉組織rna，od值略大，但是師姐說只要PCR能P出來就可以了。我想問一下各位高手，什么樣算是P出來了啊？謝謝。順便問一下普通pcr的條件和實時熒光定量pcr條件一樣么？謝謝 |
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木蟲 (正式寫手)
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3樓2013-03-05 12:08:22
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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首先，如果OD值偏大，PCR的時候有可能是擴(kuò)的是基因組的片段，所以設(shè)計引物的時候最好是跨著內(nèi)含子設(shè)計，這樣估計就像你師姐說的，PCR能P出來就可以了； 其次，能P出來的就是說除了引物二聚體的條帶外，你所擴(kuò)增的目的片段的大小，跟你設(shè)計引物時的片段大小基本相同，不能太大也不能太小，否則很可能是非特異性擴(kuò)增或者其他的情況，這種得到的片段一般都不是你想要的； 最后，實時熒光定量的條件一般是固定的，跟熒光定量的試劑有關(guān)，一般與普通PCR的條件是不一樣的，熒光定量的條件在試劑說明書上都有，包括PCR的組分和各階段的反應(yīng)時間，基本按照那個上面的做就沒有問題 做熒光定量的實驗，最好是把RNA提的質(zhì)量高一點，這樣后期做也比較順暢，其實不是很難，入門以后就簡單了，好好做，加油！  |
2樓2013-03-05 11:03:56
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4樓2013-03-05 15:27:56
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5樓2013-03-05 15:30:37
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