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guyue900905新蟲 (初入文壇)
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[求助]
什么樣地結果算是pcr后p出來了,謝謝~~~~~
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| 我提取的動物肌肉組織rna,od值略大,但是師姐說只要PCR能P出來就可以了。我想問一下各位高手,什么樣算是P出來了。恐x謝。順便問一下普通pcr的條件和實時熒光定量pcr條件一樣么?謝謝 |
新蟲 (初入文壇)
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首先,如果OD值偏大,PCR的時候有可能是擴的是基因組的片段,所以設計引物的時候最好是跨著內(nèi)含子設計,這樣估計就像你師姐說的,PCR能P出來就可以了; 其次,能P出來的就是說除了引物二聚體的條帶外,你所擴增的目的片段的大小,跟你設計引物時的片段大小基本相同,不能太大也不能太小,否則很可能是非特異性擴增或者其他的情況,這種得到的片段一般都不是你想要的; 最后,實時熒光定量的條件一般是固定的,跟熒光定量的試劑有關,一般與普通PCR的條件是不一樣的,熒光定量的條件在試劑說明書上都有,包括PCR的組分和各階段的反應時間,基本按照那個上面的做就沒有問題 做熒光定量的實驗,最好是把RNA提的質(zhì)量高一點,這樣后期做也比較順暢,其實不是很難,入門以后就簡單了,好好做,加油! |

木蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
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