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alice鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
重疊PCR引物，兩個(gè)片段分別回收后存在雜帶是怎么回事
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如題，我設(shè)計(jì)了重疊PCR的引物，在分別PCR兩個(gè)片段后，膠回收，PCR產(chǎn)物沒(méi)有或只有少量雜帶，可是膠回收后雜帶更明顯，也不一定是PCR產(chǎn)物中存在的雜帶，哪位同學(xué)知道是怎么回事？？？ PS:已經(jīng)重復(fù)做過(guò)好多次，結(jié)果都是一樣的，求解釋和解決的辦法�。�！ |
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qqxs
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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alice: 金幣+1, ★有幫助, 應(yīng)該不是試劑盒的問(wèn)題，我們做其他的是沒(méi)問(wèn)題的，而且我們電壓已經(jīng)用到了很低，跑了一個(gè)多小時(shí)，雜帶比目的條帶要大差不多一半…… 2013-04-04 13:41:40
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alice: 金幣+1, ★有幫助, 應(yīng)該不是試劑盒的問(wèn)題，我們做其他的是沒(méi)問(wèn)題的，而且我們電壓已經(jīng)用到了很低，跑了一個(gè)多小時(shí)，雜帶比目的條帶要大差不多一半…… 2013-04-04 13:41:40
| 建議膠回收的時(shí)候跑的慢一點(diǎn)，電壓小一點(diǎn)，盡量把條帶跑銳利了，如果是小片段，最好用高濃度膠，跑長(zhǎng)一點(diǎn)，切膠時(shí)才能去除雜帶。再者，你膠回收后的雜帶是比目的條帶小嗎？會(huì)不會(huì)試劑盒的東西有DNase污染？ |
4樓2013-04-03 12:15:09
alice
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
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alice: 金幣+1, ★有幫助, 謝謝，我PCR的結(jié)果是對(duì)的，甚至沒(méi)有雜帶，只是膠回收之后會(huì)出現(xiàn)雜帶！ 2013-04-02 14:44:53
wizardfan: 金幣+2, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)發(fā)帖 2013-04-03 08:02:43
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alice: 金幣+1, ★有幫助, 謝謝，我PCR的結(jié)果是對(duì)的，甚至沒(méi)有雜帶，只是膠回收之后會(huì)出現(xiàn)雜帶！ 2013-04-02 14:44:53
wizardfan: 金幣+2, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)發(fā)帖 2013-04-03 08:02:43
| PCR產(chǎn)物不是目的條帶就不要回收了，要不然回收了也是錯(cuò)的。另外如果PCR的結(jié)果拖尾比較厲害，那在膠回收的時(shí)候盡量吧拖尾的部分切掉，要不然膠回收驗(yàn)證的時(shí)候這種現(xiàn)象會(huì)更厲害。如果PCR無(wú)目的條帶，那可能是引物或模板有問(wèn)題。 |
3樓2013-04-02 14:13:03
王者歸來(lái)001
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5樓2013-04-03 23:11:27
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