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雙酶切體系構(gòu)建 新手！
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我是要做載體和目的產(chǎn)物鏈接 選的是ECOR1 和Xba I TAKARA的 看了說明書，發(fā)現(xiàn)buffer不同啊。。。盡管是同一個溫度下的，37. 這樣我要怎么做呢？ EcoRI 體系 EcoR I 1 μl 10×H Buffer 2 μl DNA ≤1 μg 滅菌水 up to 20 μl 10 × H 500mM Tris-HCl, 100mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 1,000mM NaC XbaI 體系 Xba I 1 μl 10×M Buffer 2 μl 0.1% BSA 2 μl DNA ≤1 μg 滅菌水 up to 20 μl 10 × M 100mM Tris-HCl,pH7.5 100 mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 500mM NaCl XbaI的那個還要加BSA 我不能換了呀。。因為目的基因的酶切位點是pcr加上去的，前后多加了3個保護堿基。引物都設(shè)計好了，就等RNA一提出來，RTPCR一步式完以后直接切了再酶連的。。老師會殺了我的。。我只是本科畢業(yè)論文，沒人教我。都是自己摸索的。。 難道要分步酶切再回收？重點是我現(xiàn)在那個產(chǎn)物的量還不好說，這樣會不會很浪費產(chǎn)物？最后我要做克隆載體的。。 |
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ytxy
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2樓2013-04-02 17:37:02
3樓2013-04-02 19:00:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+2, 贈人玫瑰手有余香。生物版塊歡迎你的無私奉獻。 2013-04-03 08:40:15
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| 如果是新手，可以考慮用double digestion disigner,完全控制你的雙酶切，推薦雙酶切buffer，精確計算酶的用量，保證載體和外源片段酶切完全。http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/showresult.php |
4樓2013-04-02 22:52:06
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