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yucuiyuan00金蟲 (正式寫手)
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為什么熒光定量PCR擴(kuò)增曲線呈倒S型 已有2人參與
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圖是我做的熒光定量PCR擴(kuò)增曲線,兩條線是一模一樣的樣品跑出來的,但是一個(gè)就是正常的S型曲線,一個(gè)就是倒S型的.我用的TaqMan探針.這樣的結(jié)果出現(xiàn)很多次了,就是不知道問題出哪兒了,所以來求助了. 未命名.jpg |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | QPCR 問題簡(jiǎn)答 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 專家考核, 專家辛苦了 2013-04-11 17:17:57
yucuiyuan00: 金幣+10, ★有幫助, 提高閾值線了 兩個(gè)重復(fù)的Ct值會(huì)差太多 這楊做肯定不行 我做過熔解曲線 引物沒有二聚體 不過謝謝你的回答 2013-04-12 08:28:37
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這不是倒s，而是s的前段放大了看就是這個(gè)效果，前面這個(gè)峰可以通過提高閾值（軟件設(shè)置）壓下去， 循環(huán)數(shù)太大可以通過稀釋你的模板搞定，沒有溶解曲線，不知道你的引物怎么樣，不過估計(jì)也不會(huì)太好，可以另外設(shè)計(jì)一對(duì)新引物 |
7樓2013-04-11 16:58:53
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