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小科研女dow木蟲 (小有名氣)
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[求助]
【請教大家】畢赤酵母誘導(dǎo)完畢跑SDS電泳上清和沉淀都幾乎沒有任何條帶..
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各位親們，這幾天做了畢赤酵母的誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)完后將上清和沉淀都用loading buffer處理100℃煮沸10min跑電泳，發(fā)現(xiàn)參照什么條帶也沒有，其他樣品沉淀也沒有條帶，上清中也只是微微的一個(gè)帶，且不是我的蛋白大小，如圖所示，希望大家?guī)臀曳治鲆幌�，不勝感�?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/work.gif" align="absmiddle" border="0"> 7DW3$8OBQU[`(@3K%J7H8FU.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小科研女dow: 金幣+5, ★★★很有幫助, 嘿嘿額 謝啦 2013-04-24 20:23:33
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胞內(nèi)裂解不完全，核酸過多，另外上樣量可能過多，跑出條帶糊狀 上清，酵母很多外源蛋白表達(dá)量都很低，胞外分泌的本底蛋白也很少，所以沒有明顯條帶也很正常。可以考慮用TCA濃縮后上樣。 我們實(shí)驗(yàn)室胞內(nèi)裂解樣是這樣做的：1ml菌液離心，上清和菌體分開。菌體用1ml PBS重懸，取200ul 菌懸液+50ul 5*loading buffer 煮15-20min，12000rpm 離心10min |
8樓2013-04-24 14:20:28
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