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關(guān)于質(zhì)粒擴增和感受態(tài)轉(zhuǎn)化
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看了各種感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的步驟，其中有一步轉(zhuǎn)化以后要37度搖床，1個小時。可是當(dāng)時的容器不應(yīng)該是1.5mlEP管么，怎么搖床呢？細(xì)菌生長要空氣，這樣豈不是要開蓋子，不會搖出來么?而且怎么保證無菌呢？ 另外，質(zhì)粒是點在濾紙上面的。是要用無菌水溶下來就可以了么？要不要加熱65度？50ul水好像溶不了那么大的濾紙吧。。大概取多少轉(zhuǎn)化呢？還是先測濃度再算？ 謝謝�。。� |
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gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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xjtu0025: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-24 11:15:48
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第一個問題： 一般感受態(tài)100-150ul，熱激后，冰上放3-5分鐘后加入LB 培養(yǎng)基600-750ul，這些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入搖床，要蓋上蓋子，不用考慮空氣的問題。至于怎么搖，怎么放，只要你將蓋子蓋緊，怎么放怎么搖都可以，搖30-45min就可以了 第二個問題： 質(zhì)粒點在濾紙上，把點質(zhì)粒的那個區(qū)域剪下來塞在EP管里面，用無菌水50ul(或者更小體積)溶解并離心下來，然后取適量（多取少取都可以，不放心的話，你可以多取點10ul？）轉(zhuǎn)化就可以了。不用測濃度，質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率很高，感受態(tài)熱激后甚至可以不用加LB搖直接涂板都可以 |
2樓2013-04-23 13:30:44
senix
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4樓2013-04-23 19:07:32
5樓2013-04-24 11:19:22
gyesang
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