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cherryall新蟲 (初入文壇)
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[交流]
Western Blot 實(shí)驗(yàn)問(wèn)題 已有2人參與
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各位高手,小弟有一關(guān)于Western的實(shí)驗(yàn)問(wèn)題想請(qǐng)教一下。 最近我一直在做Western,但是遇到了一個(gè)很奇怪的問(wèn)題。我用GFP標(biāo)簽抗體檢測(cè)的膜上有明顯的目的條帶,大小也符合。但是我用自己的特異性抗體檢測(cè)的時(shí)候,有幾條帶,但是卻一直沒(méi)有我的目的蛋白帶,大小總是會(huì)偏大一些。我已經(jīng)重復(fù)好幾回了,都是同樣的結(jié)果。 所以我想請(qǐng)教一下大俠們,這是什么原因呢?求賜教! |
木蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
銀蟲 (正式寫手)

新蟲 (初入文壇)
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2樓: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-09 22:01:49 不管是一條帶還是幾條帶, 只要分子量不要差得太離譜都有可能是真的. 你的問(wèn)題是信號(hào)分子量不能重合. 既然你要檢測(cè)的蛋白是和GFP融合的, 下次實(shí)驗(yàn)的時(shí)候你帶上一個(gè)野生型對(duì)照吧, 這樣你就知道是那個(gè)抗體出問(wèn)題了. 用發(fā)光Marker比對(duì)過(guò)后,可以明顯看出特異性抗體處理的條帶比GFP抗體處理的條帶要大10KD左右。而且我已經(jīng)多次變換了不同的條件來(lái)轉(zhuǎn)膜后處理,但每次結(jié)果還是一樣的。 |
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