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關(guān)于原核表達(dá)結(jié)果的分析及原因
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做了4個基因的原核表達(dá) 蛋白表達(dá)圖 圖中1,2 為空載體pET28a(+)，3,4 為一個基因，5,6為第二個基因，7,8為第三個基因，9,10為第四個基因 1,3,5,7,9為未誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)情況條帶，2,4,6,8,10為用IPTG誘導(dǎo)5h后的蛋白表達(dá)情況條帶 1,2誘導(dǎo)前后沒有變化；泳道4為誘導(dǎo)后的第一個基因，較泳道3有明顯變化，且大小與預(yù)測的蛋白大小一致；泳道6為誘導(dǎo)后的第二個基因，較泳道5也有差異，且大小與預(yù)測的蛋白大小一致； 但泳道8為誘導(dǎo)后的第三個基因，較泳道7有兩處明顯差異，其中一個為與預(yù)測大小一致的，但另外一個不知道是什么原因造成的。泳道10為誘導(dǎo)后的第四個基因，較泳道9有三處明顯差異，其中一個為與預(yù)測大小一致的，另外兩個不知道是什么，請大家?guī)兔Ψ治鲆幌隆?br /> 麻煩大家?guī)兔Ψ治鲆幌略颍x謝！ FVO@@SHH4_87IPYW0KL{IM9.jpg |
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bullfrog325
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2樓2013-05-15 20:29:53
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你做一個WESTERN Blotting,就可以說明結(jié)果了！ 用可以顯色6個His標(biāo)簽的抗體，如果western blotting的結(jié)果顯示8泳道和10泳道的蛋白條帶>=2條，說明你的蛋白降解了！這只能說明你的蛋白穩(wěn)定性較差！ 如果western結(jié)果顯示只有一條帶�。�！那你管他幾條帶，方正我還要過NI柱純化，只有我的目的蛋白能掛上，其他的又掛不上！他可能是宿主菌的非特異性條帶！第10泳道最上面最粗的那條帶可能就是非特異性條帶，你的誘導(dǎo)條件可能滿足了他的表達(dá)，所以表達(dá)量就大了�。∧憧梢詤⒄涨懊嬗镜�，都有這條帶的！！ 希望能給你點(diǎn)幫助��！ |
3樓2013-05-15 20:43:38
niushuaiji
金蟲 (正式寫手)
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不轉(zhuǎn)錄的DNA
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【答案】應(yīng)助回帖
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樓主！我問你：假如你答辯的時候，教授問你：那幾條帶是什么？ 你說：是非特異性條帶！ 教授：你怎么知道他是非特異性條帶？做過驗(yàn)證嗎？ 你說：沒有，是在小木蟲上大家都這么說的！ 教授：我還說這是你蛋白降解了呢�。。� 請問你怎么回答�。。。。。。。�！你可能還是被掛在臺子上�。。�！ 做學(xué)術(shù)，要懂得嚴(yán)謹(jǐn)性��！不能確定的問題！你就需要驗(yàn)證！學(xué)術(shù)界沒有驗(yàn)證，你就沒有發(fā)言權(quán)�。�！ 我勸你還是做個western blotting! 良言！！希望能采納······ |
8樓2013-05-16 11:29:11
26264716
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9樓2013-05-16 12:24:39
不轉(zhuǎn)錄的DNA
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10樓2013-05-16 18:16:38
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