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關(guān)于原核表達(dá)結(jié)果的分析及原因
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做了4個(gè)基因的原核表達(dá) 蛋白表達(dá)圖 圖中1,2 為空載體pET28a(+)，3,4 為一個(gè)基因，5,6為第二個(gè)基因，7,8為第三個(gè)基因，9,10為第四個(gè)基因 1,3,5,7,9為未誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)情況條帶，2,4,6,8,10為用IPTG誘導(dǎo)5h后的蛋白表達(dá)情況條帶 1,2誘導(dǎo)前后沒有變化；泳道4為誘導(dǎo)后的第一個(gè)基因，較泳道3有明顯變化，且大小與預(yù)測的蛋白大小一致；泳道6為誘導(dǎo)后的第二個(gè)基因，較泳道5也有差異，且大小與預(yù)測的蛋白大小一致； 但泳道8為誘導(dǎo)后的第三個(gè)基因，較泳道7有兩處明顯差異，其中一個(gè)為與預(yù)測大小一致的，但另外一個(gè)不知道是什么原因造成的。泳道10為誘導(dǎo)后的第四個(gè)基因，較泳道9有三處明顯差異，其中一個(gè)為與預(yù)測大小一致的，另外兩個(gè)不知道是什么，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌隆?br /> 麻煩大家?guī)兔Ψ治鲆幌略颍x謝！ FVO@@SHH4_87IPYW0KL{IM9.jpg |
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金蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你做一個(gè)WESTERN Blotting,就可以說明結(jié)果了！ 用可以顯色6個(gè)His標(biāo)簽的抗體，如果western blotting的結(jié)果顯示8泳道和10泳道的蛋白條帶>=2條，說明你的蛋白降解了！這只能說明你的蛋白穩(wěn)定性較差！ 如果western結(jié)果顯示只有一條帶�。。∧悄愎芩麕讞l帶，方正我還要過NI柱純化，只有我的目的蛋白能掛上，其他的又掛不上！他可能是宿主菌的非特異性條帶！第10泳道最上面最粗的那條帶可能就是非特異性條帶，你的誘導(dǎo)條件可能滿足了他的表達(dá)，所以表達(dá)量就大了��！你可以參照前面泳道，都有這條帶的�。� 希望能給你點(diǎn)幫助��！ |
3樓2013-05-15 20:43:38
bullfrog325
木蟲 (正式寫手)
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2樓2013-05-15 20:29:53
niushuaiji
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4樓2013-05-16 10:34:04
5樓2013-05-16 10:54:02
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