 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2665 | 回復: 5 | ||
安小安4302鐵蟲 (正式寫手)
|
[求助]
求鎳柱子純化表達蛋白的具體步驟，注意事項�。�！
|
|
如題 本科大三第一次做，老師也不了解，請教了別的老師，但具體還是要查，求有經(jīng)驗的蟲蟲給講講��！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有281人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 用Ni柱純化蛋白后鎳柱結晶了，該怎么辦
已經(jīng)有4人回復
- 蛋白表達純化問題
已經(jīng)有18人回復
- 蛋白過鎳柱，出現(xiàn)大量沉淀，請教各位
已經(jīng)有17人回復
- His- tag純化蛋白，柱子掛不上的問題
已經(jīng)有6人回復
- 小白求助基因克隆步驟
已經(jīng)有9人回復
- 鎳柱純化蛋白，遇到史上最頑固的雜蛋白
已經(jīng)有23人回復
- 包涵體上鎳離子柱純化后，洗脫收集的液體中目的蛋白不見了
已經(jīng)有10人回復
- 鎳柱純化His標簽蛋白，洗脫不下來
已經(jīng)有11人回復
- 請教，鎳柱純化蛋白后，鎳柱上的咪唑用除去嗎？
已經(jīng)有6人回復
- 目的蛋白表達純化，求教高手
已經(jīng)有12人回復
- strep tag純化，洗脫不下來
已經(jīng)有23人回復
- 親和鎳柱那個公司的好？
已經(jīng)有6人回復
- 蛋白質(zhì)純化總是掛不上柱子，全洗脫下來了，請大家?guī)兔σ幌屡?/a>
已經(jīng)有9人回復
- 蛋白表達及純化
已經(jīng)有29人回復
- 鎳柱純化哪個牌子的好用點？
已經(jīng)有12人回復
- 關于鎳柱純化，急求，�。�
已經(jīng)有12人回復
- 鎳柱純化中再生后柱子變白，什么問題？
已經(jīng)有22人回復
- His標簽的蛋白純化柱子
已經(jīng)有10人回復
- 關于鎳柱純化蛋白
已經(jīng)有10人回復
- 蛋白純化鎳柱、分子篩
已經(jīng)有9人回復
- FPLC蛋白純化堵柱子？
已經(jīng)有24人回復
- 鎳柱純化蛋白透析出現(xiàn)大量沉淀，請教
已經(jīng)有18人回復
2樓2013-05-21 08:09:16
★
myprayer: 金幣-1, 請勿單純表情回復。。。下不為例，謝謝合作， 2013-05-21 13:24:15
myprayer: 金幣-1, 請勿單純表情回復。。。下不為例，謝謝合作， 2013-05-21 13:24:15
  |
3樓2013-05-21 08:38:38
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2013-05-21 14:36:17
xbl3688
銀蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應助: 12 (小學生)
- 金幣: 1240.1
- 紅花: 1
- 帖子: 311
- 在線: 104.7小時
- 蟲號: 1348397
- 注冊: 2011-07-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
安小安4302: 金幣+3, 謝謝 2013-05-21 18:52:00
感謝參與，應助指數(shù) +1
安小安4302: 金幣+3, 謝謝 2013-05-21 18:52:00
|
1、 過柱前的注意事項： a、 樣品必須澄清、無顆粒物，否則會堵塞柱子、縮短其使用壽命； b、 包含體洗滌的最后一步及溶解時所用的Buffer中不能含EDTA、DTT、2ME； c、 確保樣品及Binding Buffer中有適量的NaCl，以防止雜離子與Ni離子競爭； 2、 過Ni柱的操作步驟： a、用去離子水洗滌，洗去20％的乙醇、除盡基質(zhì)中的空氣，并能防止下一步中Ni離子沉淀； b、5×柱體積的Charge Buffer（50mM NiSO4）充電； c、5×柱體積的去離子水洗滌，去游離的Ni離子； d、 10×柱體積的Binding Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,5mM咪唑，pH8.0）平衡； e、 上樣（手工上樣，樣品體積應根據(jù)目的蛋白的濃度來確定）； f、 20×柱體積的Washing Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,20-50mM咪唑，pH8.0）洗滌，至無蛋白檢出，收集流出液； g、 Elution Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,500－1000mM咪唑，pH8.0）洗脫，每次1ml，應呈現(xiàn)正態(tài)分布（兩邊稀，中間濃）； h、 10×柱體積的Binding Buffer洗滌。此時，即可用于純化同種蛋白，很少需要重新充電。 注：同種蛋白純化5～10次后，應進行strip和re-charge。 3、柱的清洗與保存： a、去Ni離子：a、5×柱體積的Strip Buffer（20mMTris-HCl,0.5M NaCl,50mM EDTA，pH7.4）洗滌；b、10×柱體積的去離子水洗滌。 b、去沉淀的蛋白質(zhì)：a、5×柱體積的0.5M NaOH裝滿柱子，靜置0.5～2hr；b、去離子水洗滌，至流出液的pH值為7。 c、保存：20％乙醇洗滌，再加20％乙醇保存于4℃。 |
5樓2013-05-21 15:23:54
91candy
鐵蟲 (小有名氣)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 447.4
- 帖子: 51
- 在線: 27.9小時
- 蟲號: 3219685
- 注冊: 2014-05-20
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
6樓2015-05-04 16:04:14
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 安小安4302 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +7 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +4 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿中南大學化學學碩0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +10 | 梁梁校校 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學 ，070300化學學碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分) +5 | holy J 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢里的無言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +6 | 想上岸的鯉魚 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學 ，070300化學學碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 295復試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5 | Charlieyq 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 收復試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|