 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2700 | 回復(fù): 17 | |||
zzlei金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
蛋白過鎳柱，出現(xiàn)大量沉淀，請教各位 已有1人參與
|
||
|
破碎離心完之后推濾了一下，然后過鎳柱，分別用20mL 20mM咪唑（25mM Tris，100mM NaCl)、80mM咪唑、150mM咪唑、350mM咪唑、500mM咪唑洗脫，發(fā)現(xiàn)自150mM就能洗出目的蛋白，但雜蛋白也很多。350mM洗脫時蛋白發(fā)生沉淀，且15mL的量基本能把柱子里的蛋白全洗脫下來，500時基本就什么都沒有了。 試著將350的沉淀用硫酸銨溶解，但效果不好，透析用25mM Tris，300mM NaCl，仍然沉淀揮之不去。透析一直在4℃下攪拌進(jìn)行。請教各位高手們，是咪唑濃度太高導(dǎo)致了沉淀？沉淀的蛋白是因為變性而無法再溶解？透析液我分別調(diào)了100mM NaCl、200mM、300mM，還適當(dāng)加了5%、10%甘油試著溶解沉淀，但都沒有效果。希望大家?guī)臀曳治鲆幌碌降资鞘裁丛蛞鸬�。純化N多次了，每次都是350的咪唑就沉淀了 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
272求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
352分 化工與材料
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
0703化學(xué)
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿南師大0703化學(xué) 275求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 鎳柱有很多雜蛋白是緩沖液的問題還是什么問題？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 包涵體上鎳離子柱純化后，洗脫收集的液體中目的蛋白不見了
已經(jīng)有10人回復(fù)
- His標(biāo)簽蛋白純化過程中容易沉淀，提高鹽離子、改變pH是否可以？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助酶的鎳柱純化
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 鎳柱純化His標(biāo)簽蛋白，洗脫不下來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 透析后蛋白有沉淀
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助，鎳柱純化蛋白，蛋白掛不上去
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 親和鎳柱那個公司的好？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 蛋白過鎳柱純化，在用咪唑洗脫后需要做透析，透析怎么做？？？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 關(guān)于鎳柱純化，急求，��！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 包涵體蛋白純化不溶解，怎麼辦？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 關(guān)于鎳柱純化蛋白
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于變性條件下his-tag重組融合蛋白不結(jié)合鎳柱以及部分結(jié)合鎳柱情況
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 蛋白純化鎳柱、分子篩
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于帶his-tag的膜蛋白鎳柱純化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 鎳柱純化蛋白透析出現(xiàn)大量沉淀，請教
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么鎳柱純化可溶性蛋白，電泳結(jié)果總是顯示不純呢？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】鎳柱純化的蛋白保存在-20度一個星期，拿出來都是沉淀？？
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 基因帶六個his標(biāo)簽，蛋白純化時為何掛不上鎳柱
已經(jīng)有26人回復(fù)
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗: +21 - BioEPI: 5
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10518
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1102小時
- 蟲號: 2139205
- 注冊: 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
6樓2015-01-28 21:12:42
zzlei
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 804.4
- 散金: 100
- 帖子: 258
- 在線: 83.2小時
- 蟲號: 2384026
- 注冊: 2013-03-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 無機藥物化學(xué)
2樓2015-01-27 10:49:52
zzlei
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 804.4
- 散金: 100
- 帖子: 258
- 在線: 83.2小時
- 蟲號: 2384026
- 注冊: 2013-03-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 無機藥物化學(xué)
3樓2015-01-27 10:50:47
4樓2015-01-28 14:23:51
lihe131
至尊木蟲 (文壇精英)
- 應(yīng)助: 106 (高中生)
- 金幣: 12400.9
- 散金: 3690
- 紅花: 10
- 帖子: 14218
- 在線: 263.6小時
- 蟲號: 504554
- 注冊: 2008-02-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
5樓2015-01-28 16:10:39
lxgnh166
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 396
- 帖子: 619
- 在線: 38.9小時
- 蟲號: 3038236
- 注冊: 2014-03-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
7樓2015-01-30 08:51:58
CandiceYoung
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 904
- 帖子: 7
- 在線: 1.5小時
- 蟲號: 3366124
- 注冊: 2014-08-14
- 專業(yè): 法學(xué)其他學(xué)科
8樓2015-01-30 09:36:49
CandiceYoung
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 904
- 帖子: 7
- 在線: 1.5小時
- 蟲號: 3366124
- 注冊: 2014-08-14
- 專業(yè): 法學(xué)其他學(xué)科
9樓2015-01-30 09:38:12
zzlei
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 804.4
- 散金: 100
- 帖子: 258
- 在線: 83.2小時
- 蟲號: 2384026
- 注冊: 2013-03-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 無機藥物化學(xué)
|
那個蛋白透析時將鹽濃度調(diào)到20mM、100mM、200mM、300mM試了，都不行，難道是因為之前已經(jīng)沉淀變性了無法再溶解了？ 最近又換做了另一個蛋白，這個蛋白師兄們做都沒有問題，很純，表達(dá)量也很高，但我一做又出現(xiàn)類似上述的問題。他們說350咪唑時有一部分蛋白，但從未出現(xiàn)過沉淀，500時能收到很純的。但我的基本都在350洗下來了，而且基本全部沉淀了。500里面也有，也渾濁著。。。 同樣試著換了鹽濃度，還是沒效果。 是不是我操作過程哪兒出問題了？導(dǎo)致在過程中蛋白就變性了？記得以前溶菌超聲離心完后得到的蛋白清液基本都是透明的，但現(xiàn)在每次得到的都看著很渾濁。之前我還以為是蛋白表達(dá)量很高的原因。 是不是我超聲過程出問題了？溶菌用的20mM hepes，得到80mL,分兩次超聲，每次20~30min |
10樓2015-02-01 08:56:47
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zzlei 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調(diào)劑 +3 | 多久上課 2026-03-27 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +6 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程，267求調(diào)劑 +9 | minht 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +3 | Qshers 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856材料化工調(diào)劑 總分330 +8 | zhubinhao 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+5
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | Ymlll 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 機械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程 317求調(diào)劑 +4 | JKSOIID 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調(diào)劑 +6 | jiajunX 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調(diào)劑 +4 | gdlf9999 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|