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zzlei金蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白過鎳柱，出現(xiàn)大量沉淀，請教各位 已有1人參與
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破碎離心完之后推濾了一下，然后過鎳柱，分別用20mL 20mM咪唑（25mM Tris，100mM NaCl)、80mM咪唑、150mM咪唑、350mM咪唑、500mM咪唑洗脫，發(fā)現(xiàn)自150mM就能洗出目的蛋白，但雜蛋白也很多。350mM洗脫時蛋白發(fā)生沉淀，且15mL的量基本能把柱子里的蛋白全洗脫下來，500時基本就什么都沒有了。 試著將350的沉淀用硫酸銨溶解，但效果不好，透析用25mM Tris，300mM NaCl，仍然沉淀揮之不去。透析一直在4℃下攪拌進行。請教各位高手們，是咪唑濃度太高導(dǎo)致了沉淀？沉淀的蛋白是因為變性而無法再溶解？透析液我分別調(diào)了100mM NaCl、200mM、300mM，還適當(dāng)加了5%、10%甘油試著溶解沉淀，但都沒有效果。希望大家?guī)臀曳治鲆幌碌降资鞘裁丛蛞鸬�。純化N多次了，每次都是350的咪唑就沉淀了 |
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