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zzlei金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
蛋白過(guò)鎳柱，出現(xiàn)大量沉淀，請(qǐng)教各位 已有1人參與
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破碎離心完之后推濾了一下，然后過(guò)鎳柱，分別用20mL 20mM咪唑（25mM Tris，100mM NaCl)、80mM咪唑、150mM咪唑、350mM咪唑、500mM咪唑洗脫，發(fā)現(xiàn)自150mM就能洗出目的蛋白，但雜蛋白也很多。350mM洗脫時(shí)蛋白發(fā)生沉淀，且15mL的量基本能把柱子里的蛋白全洗脫下來(lái)，500時(shí)基本就什么都沒(méi)有了。 試著將350的沉淀用硫酸銨溶解，但效果不好，透析用25mM Tris，300mM NaCl，仍然沉淀?yè)]之不去。透析一直在4℃下攪拌進(jìn)行。請(qǐng)教各位高手們，是咪唑濃度太高導(dǎo)致了沉淀？沉淀的蛋白是因?yàn)樽冃远鵁o(wú)法再溶解？透析液我分別調(diào)了100mM NaCl、200mM、300mM，還適當(dāng)加了5%、10%甘油試著溶解沉淀，但都沒(méi)有效果。希望大家?guī)臀曳治鲆幌碌降资鞘裁丛蛞鸬摹＜兓疦多次了，每次都是350的咪唑就沉淀了 |
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4樓2015-01-28 14:23:51
zzlei
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2樓2015-01-27 10:49:52
zzlei
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5樓2015-01-28 16:10:39
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