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夏沐淺新蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE結(jié)果求分析原因
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跑的是marker蛋白，12%的分離膠，沒有濃縮膠，跑著呈倒梯形，而且一共有十種蛋白的，我的出來了8條，15mA的電流，電壓開始只有60V，而且83*73*1的膠跑了1：40，時間也這么長，這個是怎么回事��？ 上面的圖是考染之后的，下面的是跑完之后拍的， SDS-PAGE自制膠 zlp 2013-06-06.jpg P6069319.JPG |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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夏沐淺: 金幣+5, ★有幫助 2013-06-17 09:39:15
137167741: 金幣+2, 小木蟲交流，共同進(jìn)步~~ 2013-06-26 18:28:54
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137167741: 金幣+2, 小木蟲交流，共同進(jìn)步~~ 2013-06-26 18:28:54
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普通SDS-PAGE在小分子量區(qū)域的分辨率變差屬于正常現(xiàn)象。而且你做的至是12%的膠，10kD以下的蛋白不太可能分開的。如果做濃度大一些的膠或者梯度膠會有所改善。如果你要分小分子量的蛋白，最好跑tricine膠。 條帶從上至下有寬窄變化一般是由于樣品中離子強度和滲透壓的問題。如果旁邊點樣的話情況會好轉(zhuǎn)的。 |
7樓2013-06-09 11:08:00
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+2, 謝謝分享經(jīng)驗 2013-06-08 08:58:42
夏沐淺: 金幣+5, ★有幫助 2013-06-08 13:56:42
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| 我覺得你的marker跑成這樣算是不錯的了。呈倒梯形主要可能是因為你只點了marker。如果在兩邊的空白泳道上點與marker同樣體積的上樣buffer來保持一下壓力，應(yīng)該可以解決這個問題。至于缺兩條帶的問題，問一下缺的什么分子量的帶？12%的膠上對有些分子量的蛋白可能分離效果差，跑不出來的。關(guān)于電壓電流的問題，你設(shè)置的是穩(wěn)壓還是穩(wěn)流跑？如果是穩(wěn)流，需要把電壓調(diào)高到200V以上，剛開始的時候電壓比較低，60V也算是正常的，隨著電泳過程電壓會逐漸升高的。跑1小時40分不是很久，根據(jù)你設(shè)置的電流，一般小膠差不多是這個時間。 |
2樓2013-06-08 00:27:33
夏沐淺
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3樓2013-06-08 14:00:48
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