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夏沐淺新蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE結(jié)果求分析原因
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跑的是marker蛋白，12%的分離膠，沒有濃縮膠，跑著呈倒梯形，而且一共有十種蛋白的，我的出來了8條，15mA的電流，電壓開始只有60V，而且83*73*1的膠跑了1：40，時間也這么長，這個是怎么回事啊？ 上面的圖是考染之后的，下面的是跑完之后拍的， SDS-PAGE自制膠 zlp 2013-06-06.jpg P6069319.JPG |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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夏沐淺: 金幣+5, ★有幫助 2013-06-08 13:56:42
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| 我覺得你的marker跑成這樣算是不錯的了。呈倒梯形主要可能是因為你只點了marker。如果在兩邊的空白泳道上點與marker同樣體積的上樣buffer來保持一下壓力，應(yīng)該可以解決這個問題。至于缺兩條帶的問題，問一下缺的什么分子量的帶？12%的膠上對有些分子量的蛋白可能分離效果差，跑不出來的。關(guān)于電壓電流的問題，你設(shè)置的是穩(wěn)壓還是穩(wěn)流跑？如果是穩(wěn)流，需要把電壓調(diào)高到200V以上，剛開始的時候電壓比較低，60V也算是正常的，隨著電泳過程電壓會逐漸升高的。跑1小時40分不是很久，根據(jù)你設(shè)置的電流，一般小膠差不多是這個時間。 |
2樓2013-06-08 00:27:33
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