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夏沐淺新蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE結(jié)果求分析原因
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跑的是marker蛋白，12%的分離膠，沒有濃縮膠，跑著呈倒梯形，而且一共有十種蛋白的，我的出來了8條，15mA的電流，電壓開始只有60V，而且83*73*1的膠跑了1：40，時(shí)間也這么長(zhǎng)，這個(gè)是怎么回事��？ 上面的圖是考染之后的，下面的是跑完之后拍的， SDS-PAGE自制膠 zlp 2013-06-06.jpg P6069319.JPG |
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夏沐淺
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9樓2013-06-17 09:41:39
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-06-08 08:58:42
夏沐淺: 金幣+5, ★有幫助 2013-06-08 13:56:42
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夏沐淺: 金幣+5, ★有幫助 2013-06-08 13:56:42
| 我覺得你的marker跑成這樣算是不錯(cuò)的了。呈倒梯形主要可能是因?yàn)槟阒稽c(diǎn)了marker。如果在兩邊的空白泳道上點(diǎn)與marker同樣體積的上樣buffer來保持一下壓力，應(yīng)該可以解決這個(gè)問題。至于缺兩條帶的問題，問一下缺的什么分子量的帶？12%的膠上對(duì)有些分子量的蛋白可能分離效果差，跑不出來的。關(guān)于電壓電流的問題，你設(shè)置的是穩(wěn)壓還是穩(wěn)流跑？如果是穩(wěn)流，需要把電壓調(diào)高到200V以上，剛開始的時(shí)候電壓比較低，60V也算是正常的，隨著電泳過程電壓會(huì)逐漸升高的。跑1小時(shí)40分不是很久，根據(jù)你設(shè)置的電流，一般小膠差不多是這個(gè)時(shí)間。 |
2樓2013-06-08 00:27:33
夏沐淺
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3樓2013-06-08 14:00:48
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【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝進(jìn)一步的幫助 2013-06-09 08:25:38
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10kd的帶有可能接近溴酚藍(lán)，所以看不太到也有可能。如果不是marker的質(zhì)量問題的話，應(yīng)該可以看到15kda的帶�？傮w來說你的marker其它帶不錯(cuò)。至于電壓?jiǎn)栴}，看你設(shè)的電流是多少了，如果是小膠10-15mA/gel電壓應(yīng)該是你說的那個(gè)范圍，時(shí)間也差不多。如果想跑快一些也是可以的，有人用20-25mA跑，不過可能會(huì)產(chǎn)生較多熱。 |
4樓2013-06-08 23:51:17
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