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克隆表達(dá) 引物設(shè)計(jì)
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急急急 現(xiàn)在我知道某基因的全長 要擴(kuò)增全長 引物怎么設(shè)計(jì)啊 網(wǎng)上有這樣說的： 1、從你的全長基因的正義鏈直接數(shù)出16-20個(gè)堿基（從ATG開始），然后在它的5‘端加上游酶切位點(diǎn)，如果需要的話加上保護(hù)堿基。 2、從你的全長基因的反義鏈從5’-3‘端直接數(shù)出16-20個(gè)堿基，后在它的5‘端加上游酶切位點(diǎn)，如果需要的話加上保護(hù)堿基。 這樣引物就設(shè)計(jì)好了。 注意：上下游的酶切位點(diǎn)不要設(shè)計(jì)反了。 難道不用軟件分析嗎 [ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-04 19:46:50
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| 網(wǎng)上說的簡單了點(diǎn)，差不多就是那個(gè)意思，不過要根據(jù)具體的基因來決定，比如長度太長（4-7kb），擴(kuò)起來比較麻煩，還要保證高保真性也很難，測(cè)序也會(huì)很費(fèi)勁。不過大部分都還好，簡單來說，還是需要軟件合適一點(diǎn)，軟件會(huì)給出最佳的上下游引物組合，上游需要包括ATG，如果載體沒有增強(qiáng)翻譯的cozak序列，你自己最好加一個(gè)，下游要包含終止序列。擴(kuò)增要用高保真酶。 |
6樓2013-07-04 18:18:29
bleach060452
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2樓2013-07-04 15:51:26
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3樓2013-07-04 15:56:31
refreshing11
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