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574759350鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
利用PET-28b構(gòu)建重組載體時(shí)將目的基因插在lac I基因中的酶切位點(diǎn)可以么
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| 在構(gòu)建兩個(gè)基因的共表達(dá)時(shí)，如果選擇將一個(gè)基因插入PET-28b中的lac I中可以么，為什么？ |
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Haibara_Ai
銅蟲 (小有名氣)
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| 不行，其實(shí)pet28a的LacI是wtLacIpromoter，表達(dá)量挺低的。。（我估計(jì)也就T7promoter的幾百分之一吧。。 而且你往那里面插 RBS怎么辦？） 只是剛好能抑制控制T7RNAP的lacUV5和PT7-LacO1，就是這樣T7RNAP經(jīng)常要需要T7的lysozyme來降低活性。 |
4樓2013-07-16 23:38:15
bleach060452
新蟲 (小有名氣)
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第一破壞了lac I基因，lac I不表達(dá)則本底表達(dá)較高（多克隆位點(diǎn)內(nèi)的蛋白），IPTG誘導(dǎo)調(diào)控效果差。 至于插入lac I基因的蛋白是能誘導(dǎo)表達(dá)的（不能調(diào)控），全部是本底表達(dá)。而且你的插入蛋白表達(dá)后兩端帶著很長的無用氨基酸序列，對(duì)你的目的蛋白沒有影響么？ 所以這種做法對(duì)兩個(gè)蛋白的表達(dá)都有影響，看你是什么目的了 |
2樓2013-07-16 14:30:45
574759350
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3樓2013-07-16 21:35:16
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5樓2013-07-17 00:37:46
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