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dingj1988銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助關于PCR相關問題!
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各位前輩: 大家好,請教個有關PCR相關問題! 本人是學藥化專業(yè)的,對生物了解的不太多!但是現(xiàn)在的工作是QC部門的,有一部分工作是做公司產(chǎn)品檢測。 最近做公司產(chǎn)品出產(chǎn)前要通過PCR檢測其有無HIV,HCV,用的是深圳凱杰生物制品有限公司的試劑盒,產(chǎn)品是激素類生化產(chǎn)品,操作都是按照試劑盒說明書對樣品前處理的,結果是到最后幾個樣品出現(xiàn)“抬頭”跡象,而且空白對照也有“抬頭跡象”,不知是哪里污染了。之前別人做的都是正常的,按說就算我的樣品處理過程中污染了,那么空白就是加酶和反應液和水直接反應應該不會有污染的呀!試驗中用到的槍和槍頭什么的都是專用的, 這幾天在排查原因也沒頭緒,好郁悶,忘各位前輩們大俠們提點好的建議,比較著急或是有什么好的推薦的資料何以推薦一下的,拜謝各位了! |

| 你是指的熒光定量PCR嗎?這個過程靈敏度很高的,有假陽性也正常,你首先看看“抬頭”的樣品的溶解曲線的峰的位置和陽性對照(如果你做了的話)是不是相同,如果相同才證明是目的基因,如果不相同,而且空白對照也有,那就考慮引物是不是不太好,可能會出現(xiàn)非特異性的擴增,換換引物試試。 |
銅蟲 (小有名氣)
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這位大俠,先感謝你給我回復!會給你送金幣的! 我做的就是熒光定量PCR,之前和我交接的一個同事從四月份開始做就有這種抬頭,之前一直都是正常的為陰性,我現(xiàn)在做的HCV,HIV在35 個循環(huán)之前都還是好的,但是到了35個循環(huán)后就開始有點抬頭了,一般HIV設置40個循環(huán)最后五個循環(huán)會抬頭,HCV設置45個循環(huán)最后十個循環(huán)會有抬頭跡象 那你說的所謂抬頭“抬頭”的樣品的溶解曲線的峰的位置和陽性對照(如果你做了的話)是不是相同,是指的是試劑盒中的陽性對照嗎?峰的位置具體是指什么位置呢?本人愚鈍不太明白,還望不吝賜教!每次都會做陽性對照標準曲線的!引物是試劑盒自帶的,一般都在有效期內(nèi)使用的! 謝謝,麻煩了! |

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