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dingj1988銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助關(guān)于PCR相關(guān)問題！
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各位前輩： 大家好，請教個有關(guān)PCR相關(guān)問題！ 本人是學(xué)藥化專業(yè)的，對生物了解的不太多！但是現(xiàn)在的工作是QC部門的，有一部分工作是做公司產(chǎn)品檢測。 最近做公司產(chǎn)品出產(chǎn)前要通過PCR檢測其有無HIV,HCV，用的是深圳凱杰生物制品有限公司的試劑盒，產(chǎn)品是激素類生化產(chǎn)品，操作都是按照試劑盒說明書對樣品前處理的，結(jié)果是到最后幾個樣品出現(xiàn)“抬頭”跡象，而且空白對照也有“抬頭跡象”，不知是哪里污染了。之前別人做的都是正常的，按說就算我的樣品處理過程中污染了，那么空白就是加酶和反應(yīng)液和水直接反應(yīng)應(yīng)該不會有污染的呀！試驗中用到的槍和槍頭什么的都是專用的， 這幾天在排查原因也沒頭緒，好郁悶，忘各位前輩們大俠們提點好的建議，比較著急或是有什么好的推薦的資料何以推薦一下的，拜謝各位了！ |
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dingj1988
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 蟲號: 1153254
- 注冊: 2010-11-22
- 專業(yè): 數(shù)論
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這位大俠，先感謝你給我回復(fù)！會給你送金幣的！ 我做的就是熒光定量PCR，之前和我交接的一個同事從四月份開始做就有這種抬頭，之前一直都是正常的為陰性，我現(xiàn)在做的HCV,HIV在35 個循環(huán)之前都還是好的，但是到了35個循環(huán)后就開始有點抬頭了，一般HIV設(shè)置40個循環(huán)最后五個循環(huán)會抬頭，HCV設(shè)置45個循環(huán)最后十個循環(huán)會有抬頭跡象 那你說的所謂抬頭“抬頭”的樣品的溶解曲線的峰的位置和陽性對照（如果你做了的話）是不是相同，是指的是試劑盒中的陽性對照嗎？峰的位置具體是指什么位置呢？本人愚鈍不太明白，還望不吝賜教！每次都會做陽性對照標(biāo)準(zhǔn)曲線的！引物是試劑盒自帶的，一般都在有效期內(nèi)使用的！ 謝謝，麻煩了！ |
3樓2013-07-17 23:55:32
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dingj1988: 金幣+16, ★★★很有幫助, 謝謝這位大俠！ 2013-07-17 23:58:42
gyesang: 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-07-18 22:07:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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gyesang: 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-07-18 22:07:27
| 你是指的熒光定量PCR嗎？這個過程靈敏度很高的，有假陽性也正常，你首先看看“抬頭”的樣品的溶解曲線的峰的位置和陽性對照（如果你做了的話）是不是相同，如果相同才證明是目的基因，如果不相同，而且空白對照也有，那就考慮引物是不是不太好，可能會出現(xiàn)非特異性的擴增，換換引物試試。 |
2樓2013-07-17 21:01:23
4樓2013-07-31 16:23:42
5樓2013-07-31 19:31:37
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