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hwchen2000金蟲 (正式寫手)
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[求助]
單條3-race通用引物擴(kuò)增出5-6個(gè)條帶，有沒有
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各位大俠，最近在做PCR，本來是想做3-race的，沒做出來，后來受壇子里的一個(gè)蟲友啟發(fā)，只用巢式引物和3-通用引物擴(kuò)增出6個(gè)條帶，結(jié)果測(cè)序結(jié)果回來不可思議，上游引物居然就是3-通用引物的互補(bǔ)序列，下游引物就是3-通用引物，后來用3-通用引物做單引物擴(kuò)增，這6個(gè)條帶居然全擴(kuò)出來，真是奇葩了，有沒有筒子能解釋一下啊 3-通用引物5'-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACGGCATGACAGTG (T)18-3' |
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bullfrog325
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-20 21:46:21
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巢式PCR第一輪的時(shí)候如果有非特異的引物/模板結(jié)合, 這種PCR產(chǎn)物就會(huì)在第二輪繼續(xù)被擴(kuò)增. 樓主的第一輪巢式PCR溫度太低了. 通用引物里面的poly-T和模板末端的poly-A(對(duì)應(yīng)原來mRNA的poly-A)這種結(jié)合是你希望發(fā)生的, 但是如果有某個(gè)cDNA中間也有和poly-A相似序列, 你的通用引物也可以勉強(qiáng)集合上, 只要這個(gè)發(fā)生就會(huì)給下面的PCR提供模板. |
hwchen20002樓2013-07-20 18:43:42
hwchen2000
金蟲 (正式寫手)
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3樓2013-07-22 10:33:57
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