 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 771 | 回復: 4 | |||
[交流]
BL21同源轉(zhuǎn)化 已有4人參與
|
|
大家好，我最近在做BL21的同學轉(zhuǎn)化，我想插入一個基因到BL21的chromosome里面，但是我一直都不成功，我是用氯霉素作為antibiotic resistance gene在我要插入的基因之后，我用的是PKD46質(zhì)粒的，然后我有幾個疑問， 第一就是pKD46的induction OD point。 第二個是是否要降低氯霉素的濃度，氯霉素很用以引起自身的變異。 第三個是 我的 PCR targeting product的大小是4.9KB，其中同源壁的長度是200bp，is that sufficient? 第四個是這個BL21 strain, 其中recA基因已經(jīng)被knocked out， 這個會不會影響到轉(zhuǎn)化？ 第五個是induce 的時常，有人和我說他induce之后是看時間的，比如3個小時，但是那個時候可能OD已經(jīng)是0.8，這時候在做competent cell會不會有點老了？ 我總是被告知做B系列的很難，我想問下這里有沒有成功的同學或者正在努力的同學共同討論分享下經(jīng)驗。 謝謝 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有55人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 我的蛋白序列鑒定都是正確的，可是為什么就是不表達，是為什么呢？附SDS-PAGE圖
已經(jīng)有51人回復
- 有什么方法把外源DNA插入到細菌的基因組上
已經(jīng)有13人回復
- 連接轉(zhuǎn)化進大腸桿菌BL21
已經(jīng)有6人回復
- 【求助/交流】在線等：E.coli BL21 轉(zhuǎn)化子在kan平板上要長多久
已經(jīng)有8人回復
- 【求助/交流】pET29a轉(zhuǎn)化E.coli BL21
已經(jīng)有4人回復
- 【求助/交流】請教關(guān)于大腸桿菌lamda RED重組問題
已經(jīng)有23人回復
Haibara_Ai
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 57 (初中生)
- 金幣: 1896.7
- 紅花: 3
- 帖子: 262
- 在線: 306.9小時
- 蟲號: 2222431
- 注冊: 2013-01-05
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
沒做過B系列 不過pkd46這個用的pbad promoter可能不如psim系列的PL+CI857好 induction@OD=0.1（略小也沒關(guān)系，但我覺得不要太晚） clora是比較難做得，不過長出來的基本一定是對的，（控制在5-10ug/ml） 4.9kb很大，在K系列里面我同實驗室的用psim19做大片段，一次大概就1-2個陽性 recA沒看出有關(guān)系，反正我操作克隆菌株時候感覺效率還高點（可能和endA有關(guān)） 3h太時間太長了，pbad大概1h，OD0.3-0.4比較好，psim的PL大概15min就夠了（不過B系列不知道） http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1626079/#!po=25.0000 這個文章試了些不同條件，不過我對他們實驗有點懷疑。。 |
2樓2013-07-21 08:20:38
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2013-07-21 10:03:43
huainianshili
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 168.2
- 散金: 311
- 紅花: 6
- 帖子: 711
- 在線: 59.4小時
- 蟲號: 454523
- 注冊: 2007-11-09
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
4樓2013-07-23 16:42:18
hb467116237
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1153
- 帖子: 80
- 在線: 114小時
- 蟲號: 1670017
- 注冊: 2012-03-06
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
5樓2014-04-23 11:19:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 fanglei1hao 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +13 | 冬十三 2026-03-15 | 14/700 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +4 | chuanzhu川燭 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料 336 求調(diào)劑 +3 | An@. 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 295復試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料學碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學，生物學，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 0854，計算機類招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 東南大學364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學學碩求調(diào)劑 +6 | 太想進步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|