 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 773 | 回復(fù): 4 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
BL21同源轉(zhuǎn)化 已有4人參與
|
|||
|
大家好，我最近在做BL21的同學(xué)轉(zhuǎn)化，我想插入一個(gè)基因到BL21的chromosome里面，但是我一直都不成功，我是用氯霉素作為antibiotic resistance gene在我要插入的基因之后，我用的是PKD46質(zhì)粒的，然后我有幾個(gè)疑問， 第一就是pKD46的induction OD point。 第二個(gè)是是否要降低氯霉素的濃度，氯霉素很用以引起自身的變異。 第三個(gè)是 我的 PCR targeting product的大小是4.9KB，其中同源壁的長(zhǎng)度是200bp，is that sufficient? 第四個(gè)是這個(gè)BL21 strain, 其中recA基因已經(jīng)被knocked out， 這個(gè)會(huì)不會(huì)影響到轉(zhuǎn)化？ 第五個(gè)是induce 的時(shí)常，有人和我說(shuō)他induce之后是看時(shí)間的，比如3個(gè)小時(shí)，但是那個(gè)時(shí)候可能OD已經(jīng)是0.8，這時(shí)候在做competent cell會(huì)不會(huì)有點(diǎn)老了？ 我總是被告知做B系列的很難，我想問下這里有沒有成功的同學(xué)或者正在努力的同學(xué)共同討論分享下經(jīng)驗(yàn)。 謝謝 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有126人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 我的蛋白序列鑒定都是正確的，可是為什么就是不表達(dá)，是為什么呢？附SDS-PAGE圖
已經(jīng)有51人回復(fù)
- 有什么方法把外源DNA插入到細(xì)菌的基因組上
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 連接轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌BL21
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】在線等：E.coli BL21 轉(zhuǎn)化子在kan平板上要長(zhǎng)多久
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】pET29a轉(zhuǎn)化E.coli BL21
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教關(guān)于大腸桿菌lamda RED重組問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2013-07-21 10:03:43
Haibara_Ai
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 57 (初中生)
- 金幣: 1896.7
- 紅花: 3
- 帖子: 262
- 在線: 306.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 2222431
- 注冊(cè): 2013-01-05
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
沒做過B系列 不過pkd46這個(gè)用的pbad promoter可能不如psim系列的PL+CI857好 induction@OD=0.1（略小也沒關(guān)系，但我覺得不要太晚） clora是比較難做得，不過長(zhǎng)出來(lái)的基本一定是對(duì)的，（控制在5-10ug/ml） 4.9kb很大，在K系列里面我同實(shí)驗(yàn)室的用psim19做大片段，一次大概就1-2個(gè)陽(yáng)性 recA沒看出有關(guān)系，反正我操作克隆菌株時(shí)候感覺效率還高點(diǎn)（可能和endA有關(guān)） 3h太時(shí)間太長(zhǎng)了，pbad大概1h，OD0.3-0.4比較好，psim的PL大概15min就夠了（不過B系列不知道） http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1626079/#!po=25.0000 這個(gè)文章試了些不同條件，不過我對(duì)他們實(shí)驗(yàn)有點(diǎn)懷疑。。 |
2樓2013-07-21 08:20:38
huainianshili
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 168.2
- 散金: 311
- 紅花: 6
- 帖子: 711
- 在線: 59.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 454523
- 注冊(cè): 2007-11-09
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2013-07-23 16:42:18
hb467116237
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1153
- 帖子: 80
- 在線: 114小時(shí)
- 蟲號(hào): 1670017
- 注冊(cè): 2012-03-06
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2014-04-23 11:19:32
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +7 | 皮皮皮123456 2026-03-22 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 269專碩求調(diào)劑 +6 | 金恩貝 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)材料導(dǎo)師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +3 | 喜歡還是不甘心 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑0854 +3 | assdll 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑 +5 | 守候夕陽(yáng)CF 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +16 | 于海海海海 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|