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sxxuan金蟲 (著名寫手)
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[求助]
再次求助——蛋白純化結(jié)果
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感謝大家上次對我的實驗指導(dǎo)，聽從意見，換了離子交換樹脂，改成了Capto adhere，沒怎么看文獻就先做了一次實驗，請大家?guī)兔Ψ治鼋Y(jié)果及指正啊，謝謝了 上樣是10ml，蛋白含量大概1.5mg左右，柱子是1ml的預(yù)裝柱。緩沖液是50mM Tris，pH6.0，洗脫用1M NaCl。上柱發(fā)現(xiàn)目的蛋白流穿，洗脫時候只有很弱的峰，檢測了還是還有目的蛋白。我看這種填料的是吸附雜蛋白和DNA的。我檢測了一下，發(fā)現(xiàn)DNA去除效果很差。我該用什么條件繼續(xù)摸索呢？我自己是打算改緩沖液的pH值，看下能不能讓蛋白掛柱，請問可行不？ 1.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-24 at 09:26 ] |
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“上柱發(fā)現(xiàn)目的蛋白流穿，洗脫時候只有很弱的峰，檢測了還是還有目的蛋白” 你可以嘗試一下pH了，就像樓上說的，了解一下你的蛋白的PI比較有必要。 同樣的pH，也有很多種的buffer來選擇，并且binding buffer的鹽濃度也是可以嘗試的，下次跑的時候多平衡一下你的柱子試試。 |
3樓2013-07-23 21:19:30
danbomingyue
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