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sxxuan金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
再次求助——蛋白純化結(jié)果
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感謝大家上次對(duì)我的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，聽(tīng)從意見(jiàn)，換了離子交換樹(shù)脂，改成了Capto adhere，沒(méi)怎么看文獻(xiàn)就先做了一次實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鼋Y(jié)果及指正啊，謝謝了 上樣是10ml，蛋白含量大概1.5mg左右，柱子是1ml的預(yù)裝柱。緩沖液是50mM Tris，pH6.0，洗脫用1M NaCl。上柱發(fā)現(xiàn)目的蛋白流穿，洗脫時(shí)候只有很弱的峰，檢測(cè)了還是還有目的蛋白。我看這種填料的是吸附雜蛋白和DNA的。我檢測(cè)了一下，發(fā)現(xiàn)DNA去除效果很差。我該用什么條件繼續(xù)摸索呢？我自己是打算改緩沖液的pH值，看下能不能讓蛋白掛柱，請(qǐng)問(wèn)可行不？ 1.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-24 at 09:26 ] |
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鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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“上柱發(fā)現(xiàn)目的蛋白流穿，洗脫時(shí)候只有很弱的峰，檢測(cè)了還是還有目的蛋白” 你可以嘗試一下pH了，就像樓上說(shuō)的，了解一下你的蛋白的PI比較有必要。 同樣的pH，也有很多種的buffer來(lái)選擇，并且binding buffer的鹽濃度也是可以嘗試的，下次跑的時(shí)候多平衡一下你的柱子試試。 |
3樓2013-07-23 21:19:30
alicelchf
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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2樓2013-07-23 20:16:06
danbomingyue
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4樓2013-07-24 08:33:14
sxxuan
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5樓2013-07-24 09:03:59
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