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Jianxiao_H金蟲 (正式寫手)
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[求助]
怎么做實時定量pcr？
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吐槽一句：學姐什么都不懂��！  現(xiàn)在有某昆蟲的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果，也篩選出功能基因了。 想做定量pcr，比較功能基因在該昆蟲不同齡期的表達規(guī)律。 該怎么開始？ 序列有有多，我要從哪里開始試劑引物？ 選TaqMan熒光探針還是SYBR熒光染料？如果用探針是不是還要設(shè)計探針�。� 選什么做內(nèi)參基因？應(yīng)該是要選一個在不同年齡階段均表達穩(wěn)定的基因吧。18S rRNA可以么？ 還有能不能給我解釋一下，外標法和外參法有什么區(qū)別、內(nèi)標法，內(nèi)參等等這些易混淆的概念。 謝謝。  |
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Jianxiao_H
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7樓2013-07-27 12:27:07
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是在不懂的話還是多看文獻吧，尤其是類似的材料的qRT-PCR。 文獻就是開始的第一步。 如果只是對一些基因進行不同發(fā)育期的表達譜分析，建議利用熒光染料做，當然對于非常感興趣要進行下游其它的研究的話可以設(shè)計個TaqMan探針(此時內(nèi)參基因也要利用TaqMan探針標記)。 至于內(nèi)參基因的選擇也是利用文獻先檢索吧，如果實在是沒有相關(guān)文獻，那么光確定一個內(nèi)參基因就是一篇文章了。 其它的問題還是先看文獻吧。有人認為很簡單，細致起來很繁瑣。 |
2樓2013-07-25 20:17:41
Jianxiao_H
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3樓2013-07-26 11:22:16
4樓2013-07-26 11:58:08
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