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wangdongadd新蟲 (小有名氣)
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[求助]
克隆方面的問題
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| 我的樣品先經(jīng)過DGGE然后切膠回收，后用試劑盒進(jìn)行了純化，請(qǐng)問在做克隆連接時(shí)還需要加A嗎？16度連接過夜可以嗎？做陽性質(zhì)粒對(duì)照和陰性對(duì)照時(shí)也需要連接這一步嗎？還是轉(zhuǎn)化的時(shí)候再在感受態(tài)加入質(zhì)粒和無菌水？加多少呢？謝謝！ |
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loveskyzhou
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4樓2013-07-26 15:13:40
gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wangdongadd(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩，gy版熱心腸 2013-07-26 08:54:58
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1. 你連的是什么載體，T載體還是T-blunt載體，如果是T載體，回收產(chǎn)物需不需要加A，取決于你用的什么類型DNA聚合酶，如果是高保真酶，那就需要加A，如果是Taq酶擴(kuò)增的，就不需要再加A 2. 普通的T4 DNA Ligase一般需要16度連接過夜 3. 陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，主要是驗(yàn)證感受態(tài)細(xì)胞，平板抗性，陰性對(duì)照主要是驗(yàn)證載體自連，T載體用不著陰性對(duì)照 |
2樓2013-07-25 22:51:05
wangdongadd
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3樓2013-07-26 14:42:00
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