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[求助]
有關(guān)嗜熱蛋白純化的問(wèn)題
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各位蟲(chóng)友：我現(xiàn)在在做蛋白純化。 先介紹一下我的蛋白:我做的蛋白是一種嗜熱蛋白，在100℃下還能保持很好的活性。所以就想通過(guò)煮蛋白的方式，使雜蛋白變性沉淀下去，而上清中只保留 我自己的目標(biāo)蛋白。但是現(xiàn)在我不管怎么煮在距離目標(biāo)蛋白很近的位置總有雜蛋白存在，怎么煮都煮不干凈。我的宿主菌是大腸桿菌（rossetta），按說(shuō)大腸桿菌是不會(huì)有嗜熱的蛋白存在的，怎么會(huì)除不干凈呢？有用過(guò)這種純化蛋白的蟲(chóng)友 們能否借鑒一些純化經(jīng)驗(yàn)�。⌒∠x(chóng)將不甚感激！ 下面附純化蛋白電泳圖一張： 純化蛋白.jpg |
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克隆大蝦
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
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4樓2013-07-28 22:42:16
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hraikeyan(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，熱心的顧問(wèn)分子生物期待更多精彩 2013-07-27 23:58:50
hraikeyan: 金幣+3, ★★★很有幫助, 我的蛋白上沒(méi)有標(biāo)簽，因?yàn)樗鞘葻岬南胫笠幌戮图兓蓛袅�，所以沒(méi)有加標(biāo)簽。我之前也跑過(guò)空大腸的，空大腸也是有這條條帶的。 2013-07-28 09:14:53
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hraikeyan: 金幣+3, ★★★很有幫助, 我的蛋白上沒(méi)有標(biāo)簽，因?yàn)樗鞘葻岬南胫笠幌戮图兓蓛袅�，所以沒(méi)有加標(biāo)簽。我之前也跑過(guò)空大腸的，空大腸也是有這條條帶的。 2013-07-28 09:14:53
| 確定下面的小帶一定是雜蛋白嗎？某些蛋白在SDS-PAGE上會(huì)跑出這樣的帶來(lái)，可能是蛋白有結(jié)合輔因或者有修飾造成遷移率不同。你的重組蛋白上有帶標(biāo)簽吧，你可以做一下western檢查是否兩條帶都是目的蛋白。 |
2樓2013-07-27 23:25:13
cicelyzh
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3樓2013-07-28 11:10:50
5樓2013-07-29 09:40:25
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