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ZOEY21金蟲 (小有名氣)
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[求助]
熒光標記引物的稀釋
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去年1月合成的ssr熒光標記引物，干粉存于-20度。合成報告單找不到了，此為背景。 問題：1）熒光引物還能用嗎？分型的話信號會不會減弱到測不到？ 2）現(xiàn)在要稀釋干粉引物為100μM，合成報告單沒有，熒光標記的正向引物管壁上有加入溶解液的量，普通反向引物管壁上沒有注明。我就自己算啊，根據(jù)公式和引物序列分子量（沒有考慮熒光標記分子量），再算需加溶解液的量，算出的熒光標記引物需要加溶解液的量與管壁上給出量不吻合，3管差1μl，1管差2μl，1管差3μl，2管差6μl，計算得到的量比較高。請問原因？是否因為加熒光標記后引物分子量增大。如此，反向引物能否按照計算所得稀釋？ 寫的太啰嗦，麻煩各位給掌眼了，謝謝！ p.s.引物分子量計算按如下公式：MW=（A堿基數(shù)×312）+（C堿基數(shù)×288）+（G堿基數(shù)×328）+（T堿基數(shù)×303）-61 |
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ZOEY21
金蟲 (小有名氣)
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2樓2013-08-26 10:32:22
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