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qureen新蟲 (初入文壇)
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[求助]
各位大俠，熒光定量中怎么設(shè)置檢測熒光的溫度呢
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| 各位大俠，我看到說提高檢測熒光的溫度可以避免二聚體的產(chǎn)生，請問這個(gè)熒光檢測溫度怎么設(shè)置呢？ |
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1.我們一般設(shè)計(jì)realtime PCR引物Tm都是60度左右，實(shí)在不好再調(diào)整PCR條件。（設(shè)定為60度，是為了一次可以檢多個(gè)基因，并同內(nèi)參的條件一致） 2。我們一般先跑普通PCR（但用realtime PCR的條件），如果有引物二聚體先降低引物濃度，不行再改為常規(guī)的三步法摸引物的退火溫度（有梯度模塊的PCR儀，很快就會搞定） 3.根據(jù)三步法的條件修改熒光PCR儀的設(shè)定。 以上都不行只能重新設(shè)計(jì)引物了。另外使用內(nèi)參的話，要同時(shí)檢測同等條件下內(nèi)參的擴(kuò)增情況。 |
8樓2013-09-23 19:30:16
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