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1M Tris溶解多肽為什么溶液變粘稠？
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RT，我無意中拿了1M的Tris-Hcl 溶解了一個多肽，結(jié)果溶液變的粘稠，而用10mM的Tris以及hepes、NaAC-HAC這些緩沖液溶解都沒有類似的情況。這個1M Tris溶的肽我拿去和銅離子滴定，發(fā)現(xiàn)有結(jié)合，而溶在其他buffer里的同樣的肽卻沒有結(jié)合，這是什么原因？是因為這個肽只有在這么高濃度的tris里才能有特定的結(jié)構(gòu)和銅結(jié)合還是高濃度的Tris和肽發(fā)生了什么反應(yīng)導(dǎo)致實驗儀器誤判，和銅無關(guān)？ 我的這個肽長24個aa，偏堿性，偏親水性。 |
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我用空白的1Mtris和銅滴定沒有峰出現(xiàn)。我用幾個位點突變了的此肽溶于1Mtris和銅滴定也沒有峰。。。看上去似乎還是和此肽有關(guān)。不過我這個肽是在公司合成的，拿到手的時候感覺沒有凍干，不是那種凍干粉的狀態(tài)，而是冰塊狀，然后我拿這個肽去做出了那次有峰的結(jié)果，后來我覺得這個肽不保險，就讓公司重新凍干了（還是冰塊狀，但是體積縮小）之后給我，我再去拿了用10mM的Tris溶了就做不出來了。那銷售說可能第一次的里面會殘留有乙腈，但是技術(shù)卻一口咬定不會有乙腈。我對這個合成不懂，似乎是用反相色譜，報告單上寫著A相是TFA。。乙腈應(yīng)該是能和銅結(jié)合的，不過凍在-80度里乙腈不會揮發(fā)掉嗎？而且就算有殘余稀釋到實驗濃度時是不是已經(jīng)很少了？。不知道是因為第一次的肽里面有乙腈出現(xiàn)了假象，還是因為第二次刻意再去凍干使得此肽受到了破壞。。。。糾結(jié)無比，難道此實驗將永無定論？  |
3樓2013-09-18 09:43:01
hl16010921
木蟲 (正式寫手)
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝分析，歡迎交流 2013-09-14 07:05:23
luba: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝！我按你說的試試！ 2013-09-15 22:12:54
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| 1。tris本身含氨基，能和銅絡(luò)合。2.1M的tris本身就有點粘，但不明顯，可能是多肽在水中溶解度有限，而tris競爭了大量的氫鍵導(dǎo)致肽成凝膠狀，估計再加tris，肽就要析出了。3.不排除多肽在高鹽情況下出現(xiàn)了組裝，或形成了特定的高級結(jié)構(gòu)。4.LZ可以用相應(yīng)離子強度的非氨體系試試能否重復(fù)出這個結(jié)果，再試試無機氨體系，看是不是Tris的專有反應(yīng)（Tris含氨基和羥基，都可以配位Cu) |
2樓2013-09-13 13:59:59
hl16010921
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| 1.一般凍干前會旋蒸掉乙腈和TFA，否則傷凍干機，但由于TFA和多肽的氨基成鹽會殘余一些。2.一般只要不反復(fù)凍融多肽還是穩(wěn)定的。凍干不會影響多肽的。3.會不會和肽的濃度有關(guān)，因為多肽的狀態(tài)不同質(zhì)量稱量可能誤差很大。建議用紫外光譜看看定一下濃度（如果用HPLC定量更準）4.先別急，先想好兩次實驗的差異，再一個因素一個因素的加上去。tris-HCl pH值是不變的，乙腈可能會對多肽的結(jié)構(gòu)有影響，摻入微量的乙腈試試。另外該肽有無半胱氨酸這樣的不穩(wěn)定氨基酸或二硫鍵，穩(wěn)定性如何？實在不行也別放在心上，畢竟只是意外的收獲，原定的實驗計劃還是主要的。 |
4樓2013-09-18 10:09:36
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