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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 如何做分步雙酶切
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[交流]
如何做分步雙酶切 已有6人參與
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| 第一個酶切完跑膠回收？那豈不是濃度會很降低？不跑膠回收的話，熱失活完直接加第二種酶？那與之對應的buffer怎么加呢？請賜教�。。。≡皆敿氃胶茫。。�！ |
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xiaopeiliang
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2樓2013-09-10 22:32:09
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-09-11 11:48:26
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-09-11 11:48:26
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1.明確你酶切的是什么。載體？還是PCR產物？ 載體:酚/氯仿抽提或核酸純化試劑盒回收，這樣回收效率應該比膠回收高。然后再進行下一步單酶切，純化試劑盒或膠回收。 PCR產物:跑膠，若無二聚體，核酸純化試劑盒回收比較好，當然，無論有無二聚體，膠回收肯定都沒有問題。然后，分步單酶切與載體相同操作，酚/氯仿或試劑盒。純化試劑盒一定要注意，要弄清楚能回收多大的片段。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] [ Last edited by ykluuniu on 2013-9-10 at 22:56 ] |
3樓2013-09-10 22:54:49
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7樓2014-10-07 10:22:21
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