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蘭羊羊銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助RNA提取后 PCR為啥跑不出來(lái)
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| 提取RNA 很好 小膠檢測(cè)條帶很清楚,為啥跑RT-PCR 用的引物是隨機(jī)引物Radom. rapad-PCR用的隨機(jī)錨定配對(duì)的,,為啥檢測(cè)不出來(lái)?xiàng)l帶啊,求大神指點(diǎn)啊 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
銀蟲(chóng) (初入文壇)
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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你的RNA中存在較高含量的多酚類物質(zhì),致使你的反轉(zhuǎn)錄酶失活,這是你進(jìn)行PCR失敗的主要原因。 建議方法:使用CTAB-LiCl法提取RNA,此種方法國(guó)外已經(jīng)發(fā)了很多文章,你可以查一下。目前,植物RNA的提取要難于動(dòng)物,原因在于植物細(xì)胞中有著過(guò)多的植物多酚,如蘋(píng)果、棉花。你可以查一下相關(guān)資料。另外,你現(xiàn)在所提取的RNA如果真如前面我所講的情況,基本已無(wú)法補(bǔ)救,多酚與糖、蛋白質(zhì)、核酸緊密絡(luò)合,是無(wú)法分開(kāi)的。RNA在水中的溶解度為40微克/微升,具備較高的溶解能力。 |
銀蟲(chóng) (初入文壇)
銀蟲(chóng) (初入文壇)
銀蟲(chóng) (初入文壇)
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