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liwenwhpu新蟲 (初入文壇)
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擬南芥pcr圖分析
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我做的是擬南芥純和鑒定，每個孔用的引物都是RP和LBb1.3，各0.5ul。我的pcr條帶一直不亮，不清楚為什么。前6個孔的樣品是同一品種的擬南芥，只是DNA濃度不同，1,3,5的濃度約400ngul，2,4,6的濃度約為1100ng/ul。我這次是想看dNTP濃度多少合適，所以第1,2孔的dNTP是0.5ul，3,4孔的是1.0ul，5,6孔的是1.5ul。第7孔加的是col，dNTP 1ul。體系是25ul，10×buffer 2.5ul，pfu酶：0.1ul，模板1ul，水 21ul，引物共1ul。pcr：94℃:3min；94℃:30s,56℃:30s,72℃:1min,30個循環(huán);72℃:5min;16℃:5min.請大俠解答為什么我的條帶不亮，是引物加多了嗎？但是1,3,5孔沒有形成引物二聚體的為什么條帶也不亮？ 2013.9.20.gif |
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