 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2337 | 回復(fù): 14 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
doubleping新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
虐心的PCR-DGGE
|
||||
|
實(shí)驗(yàn)做得我快絕望了�。。�！ 我是做土壤微生物群落，先提取了土壤中的DNA，呈黃棕色，經(jīng)過(guò)稀釋不同倍數(shù)之后擴(kuò)增出了16S，然后擴(kuò)增了V3區(qū)，但是有非特異性條帶，接著用V3產(chǎn)物去跑DGGE，62℃，20V，10min預(yù)跑，然后是62℃，7H，120V，一直在調(diào)試最好的梯度，剛調(diào)試到梯度47%-62%的時(shí)候，感覺(jué)條帶還是有點(diǎn)靠下面，想再試試50%-60%。。。。。。可是悲劇就來(lái)了，竟然一條條帶都沒(méi)有跑出來(lái)，或者有時(shí)候有一塊膠有條帶有一塊沒(méi)有條帶，（我用的是緩沖液7L的bio-rad的DGGE，可以同時(shí)跑兩塊膠）但是我點(diǎn)的DL2000都有跑出來(lái)，真讓我郁悶�。�！我以為是樣品問(wèn)題，但是同樣的樣品檢測(cè)有亮帶，還有一次竟然同樣的樣品第二次DGGE有條帶還很多。 想重新擴(kuò)增樣品，可是這兩天本來(lái)可以全部擴(kuò)增出來(lái)的樣品現(xiàn)在16S竟然有一半擴(kuò)不出來(lái)，16S產(chǎn)物全部擴(kuò)不出V3區(qū)，想不出什么道理！ 有16S可以擴(kuò)出來(lái)，酶和16S引物應(yīng)該是沒(méi)有問(wèn)題的，V3的引物是剛稀釋的可能有問(wèn)題，其他我就想不出來(lái)了，各位大俠幫我找找原因吧 我的體系，16S和V3區(qū)一樣都是30ul， 2*taq mastermix 15ul 引物各 1ul 模板 1ul ddH2O 12ul 16S程序：94℃ 5min；94℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 2min；30循環(huán)；72℃ 10min。 V3區(qū)程序：touchdown DGGE膠：47%-62% 47%：100%變性劑 9.4ml+0%變性劑 10.6ml+80ul APS+10ul TEMED 62%:100%變性劑 12.4ml+0%變性劑 7.6ml+80ul APS+10ul TEMED |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 環(huán)境微生物 | dgge |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有222人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 細(xì)菌DGGE-PCR，用的V3區(qū)引物 總是兩條帶
已經(jīng)有4人回復(fù)
- pcr-dgge分析土壤微生物群落要做平行樣嗎？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 土壤真菌PCR-DGGE中真菌ITS區(qū)引物的選擇
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于PCR-DGGE技術(shù)，此技術(shù)能分析土壤中的真菌嗎？用什么引物好？需要注意什么？
已經(jīng)有19人回復(fù)
- PCR-DGGE技術(shù)尋求
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 細(xì)菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR-DGGE的引物設(shè)計(jì)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 降落PCR一直 跑不出來(lái)（用于DGGE）
已經(jīng)有16人回復(fù)
- DGGE引物，real-time PCR引物和 clone library引物 的轉(zhuǎn)化問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助高手分析DGGE圖譜，附PCR圖和DGGE圖譜
已經(jīng)有6人回復(fù)
- DGGE之后的PCR P不出來(lái)了
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】DNA提取方法（用于PCR-DGGE）
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】細(xì)菌V3區(qū)PCR出現(xiàn)問(wèn)題，引物為357和518，用于DGGE！
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】DGGE 膠回收后做PCR沒(méi)有條帶是怎么回事？？急�。�！
已經(jīng)有36人回復(fù)
lhf903
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
- 金幣: 3686.5
- 散金: 1020
- 紅花: 2
- 帖子: 360
- 在線: 328.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1910016
- 注冊(cè): 2012-07-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2013-09-22 11:51:42
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2013-09-22 11:51:42
|
首先你的DNA是不是有問(wèn)題； 再來(lái)PCR引物是不是多了點(diǎn)，P不出來(lái)的原因太多，這個(gè)要你自己慢慢找原因了； 最后DGGE，感覺(jué)你做的比較亂，先說(shuō)做膠，因?yàn)槲覀兺ǔＷ龅奶荻却蠖嗖怀^(guò)70%，所以你可以配一個(gè)70%和0%的變性劑，再來(lái)配相應(yīng)的梯度，這樣可使控制一下誤差，不然每次做膠的梯度誤差太大；還有梯度不需要這么精確，差不多就可以。電泳的時(shí)間和電壓你可以參照別人的先跑，再自己調(diào)整，剛開(kāi)始電壓大一點(diǎn)，我都是先200V，5min之后再接著跑的。 |
3樓2013-09-22 08:54:20
2樓2013-09-22 07:57:45
doubleping
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6.3
- 散金: 10
- 帖子: 104
- 在線: 20.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1939351
- 注冊(cè): 2012-08-15
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
4樓2013-09-22 09:42:02
doubleping
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6.3
- 散金: 10
- 帖子: 104
- 在線: 20.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1939351
- 注冊(cè): 2012-08-15
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
5樓2013-09-22 09:45:02
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 290分調(diào)劑求助 +6 | 吉祥止止陳 2026-03-25 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 材料 304 +17 | 荷包蛋hyj 2026-03-26 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 085602 307分 求調(diào)劑 +8 | 不知道叫什么！ 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 土木304求調(diào)劑 +4 | 兔突突突， 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) +19 | 妮妮ninicgb 2026-03-27 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 不挑專業(yè) 求收留 +3 | Yam. 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08工科，295，接受跨專業(yè)調(diào)劑 +6 | lmnlzy 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 293分求調(diào)劑，外語(yǔ)為俄語(yǔ) +5 | 加一一九 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +5 | Faune 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+11
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +12 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛(ài)羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 壓國(guó)家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | A child 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +12 | 大饞小子 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑總分293英一數(shù)二 +4 | 鋼鐵大炮 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|