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美麗的家園金蟲 (正式寫手)
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[求助]
切膠回收DNA失敗，沒經(jīng)驗(yàn)，望指點(diǎn)
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1. 吸附柱平衡：向吸附柱CB2中加入500 μL 平衡液BL，12，000 r/min 離心 1 min,棄廢液，放回收集管 2. 搗碎膠，加入5倍PB結(jié)合液，混勻。60℃水浴10 min ，直到膠溶解為止，期間上下顛倒2~3次。 3. 冷卻后，加入到已經(jīng)平衡好的CB2中，室溫2~5 min，12，000 r/min 離心 1 min,棄廢液，放回收集管 4. 加入600 μL漂洗液PW (其中含80％乙醇),放置5 min，12，000 r/min 離心 1 min,棄廢液，放回收集管 5. 重復(fù)上述4操作一次 6. 12，000 r/min 離心 2 min,CB2 開蓋2~5 min，并甩空柱去除殘留乙醇 7. 將CB2置于干凈的收集管，加入洗脫液EB 30 μL，50℃ 水浴 2min，靜置2~5 min 8. 12，000 r/min 離心 1 min,管底溶液為DNA 溶液 9. 去5 μL進(jìn)行0.8 ％瓊脂糖電泳檢測 PCR 后檢測有亮帶，回收失敗，不知還有什么需要注意的，望指點(diǎn) |
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2樓2013-10-04 08:56:38
【答案】應(yīng)助回帖
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是不是PCR產(chǎn)物本來不是很多，你回收后電泳檢測的時(shí)候上樣量太少，看不到啊。 一般我都按照損失一半來算的。 不過，我很好奇你用的啥kit。啥試劑盒要用5倍PB  你前面用5倍PB，感覺膠濃度應(yīng)該很大，那片段應(yīng)該挺短； 可是你最后用0.8%的膠檢測，又感覺片段應(yīng)該挺大。 嚴(yán)格按照說明書做，如果回收條帶很亮（正常曝光），不出來就換kit。 |
3樓2013-10-04 14:28:31
desheng101
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6樓2013-10-04 19:07:04
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8樓2013-10-04 20:46:28
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10樓2013-10-04 20:56:28
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