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SDS-PAGE中蛋白條帶位置不一致
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| 前后幾次SDS-PAGE中，同樣的樣品跑出來的蛋白條帶位置與Marker對比不一樣，第一次跑的時候，我要的目的蛋白條帶與Marker 的25 kd 的帶幾乎一樣大，但是后來跑的時候那條帶又比Marker 25 KD 的帶大了，在它上邊，哪位大俠知道這是什么原因呀？！ |
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2樓2013-10-23 10:40:00
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【答案】應助回帖
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如果真的形成分子間的二硫鍵或酰胺鍵或者其他的共價鍵，SDS是不可能對其加以斷裂和直接的阻止分子間的二硫鍵或酰胺鍵的形成的；因為要可能形成分子間的二硫鍵或酰胺鍵的氨基酸側鏈基團在變性的蛋白質中處于分子表面，而且PH和反應物濃度合適又處于溶液環(huán)境和暴露于空氣中，SDS是不可能阻礙兩個巰基氧化為一個二硫鍵和羧基與氨基形成酰胺鍵。SDS使得蛋白質變性成為直的桿狀分子倒是有可能在一定程度上消除球形蛋白質的空間位阻，當然SDS結合上蛋白質表面有形成新的空間位阻，但是SDS不可能每時每刻都結合在蛋白質的表面，而且對于桿狀的蛋白質的末端SDS是封堵不住的。再有，蛋白質也許原來就有二硫鍵存在，SDS本身是不可能打開二硫鍵的，當然如果上樣時加上DTT，巰基乙醇當然能打開二硫鍵，但是SDS-PAGE不是一定要加上DTT，巰基乙醇，樓主也沒有提供此種信息。 何況即使加了DTT，巰基乙醇，酰胺鍵在一定條件下還是會形成，與SDS無關。 所以4樓的說法不對！ 其他的共價鍵情況很復雜，這里不討論。 |
8樓2013-10-24 01:19:59
3樓2013-10-23 12:16:58
20083630zhan
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