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[求助]
SDS-PAGE中蛋白條帶位置不一致
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| 前后幾次SDS-PAGE中，同樣的樣品跑出來(lái)的蛋白條帶位置與Marker對(duì)比不一樣，第一次跑的時(shí)候，我要的目的蛋白條帶與Marker 的25 kd 的帶幾乎一樣大，但是后來(lái)跑的時(shí)候那條帶又比Marker 25 KD 的帶大了，在它上邊，哪位大俠知道這是什么原因呀？！ |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 蛋白表達(dá)純化與檢測(cè) |
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20083630zhan
木蟲(chóng) (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-24 00:31:23
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-24 00:31:23
| 不可能是蛋白質(zhì)凝聚產(chǎn)生的，因?yàn)槟阕鯯DS-PAGE時(shí)，你已經(jīng)將你的目的蛋白變性，因此不存在分子間的二硫鍵，也更無(wú)分子間構(gòu)象改變一說(shuō)，如果實(shí)在你要確定你的蛋白的分子量，那么你可以做遷移率實(shí)驗(yàn)，將你的蛋白Marker 做遷移率試驗(yàn)，得到標(biāo)曲，然后再用你的目的蛋白做遷移率實(shí)驗(yàn)，再通過(guò)標(biāo)曲找到對(duì)應(yīng)的分子量 |
4樓2013-10-23 22:42:04
凌波麗
專家顧問(wèn) (知名作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-24 00:31:07
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| 如果沒(méi)有改變電泳膠和緩沖溶液的濃度和類型，那么最有可能是你的樣品蛋白質(zhì)有凝聚或者共價(jià)修飾出現(xiàn)或較大的構(gòu)象改變，Marker存在降解或較大的構(gòu)象改變。檢測(cè)構(gòu)象改變的方法可以用紅外、紫外對(duì)比不同批次的樣品和Marker，檢測(cè)是否有降解降解或者共價(jià)修飾可用質(zhì)譜檢測(cè)不同批次的樣品和Marker。 |
2樓2013-10-23 10:40:00
3樓2013-10-23 12:16:58
凌波麗
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5樓2013-10-24 00:58:34
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