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淺笑包包新蟲 (小有名氣)
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[求助]
構(gòu)建重組載體 已有2人參與
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| 要構(gòu)建過表達(dá)載體，把一段目的基因插在載體中間，但是老師說酶切位點(diǎn)后面有GUS基因，所以不能把目的基因的終止子放在引物里，否則后面的基因就不能表達(dá)了，我就不懂了，請問不是每個(gè)編碼蛋白質(zhì)的序列都有自己的起始密碼子和終止密碼子嗎？為什么插入片段的終止子會影響載體里其它基因的表達(dá)？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
淺笑包包(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 代發(fā)~ 感謝應(yīng)助！ 2013-10-31 23:52:06
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
淺笑包包(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 代發(fā)~ 感謝應(yīng)助！ 2013-10-31 23:52:06
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這個(gè)問題要看你的質(zhì)粒的種類了。通讀質(zhì)粒圖譜可以知道的。 說一個(gè)我做帶GFP標(biāo)簽的的作為例子，如果GFP是在你的蛋白后融合表達(dá)到一起的，那么這個(gè)GFP在是沒有起始密碼的，其起始密碼子就是你目的蛋白的起始密碼。同時(shí)你的目的蛋白也不能有終止密碼，否者在GFP表達(dá)之前就終止表達(dá)不出來了。而融合蛋白最終是用GFP的終止密碼作為終止密碼的。但如果GFP自帶起始密碼，目的蛋白和GFP不融合，那你的目的蛋白就要帶上最終密碼的。 呵呵 |
2樓2013-10-28 16:11:49
淺笑包包
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3樓2013-10-28 16:36:27
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4樓2013-12-24 19:00:50
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-25 00:01:21
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-25 00:01:21
| 這就是為什么咱們異元表達(dá)后的蛋白都叫重組蛋白。實(shí)際上就是你的目的片段序列和一系列小的元件（HIS標(biāo)簽、用于分子雜交的抗原、GFP標(biāo)簽一類）融合表達(dá)的產(chǎn)物，就像你說的GUS在重組蛋白里就是一個(gè)有功能的結(jié)構(gòu)域~~，整個(gè)重組蛋白的表達(dá)只需要一個(gè)啟動子，一個(gè)終止子。對這些小元件的取舍完全在于你終止子的位置，如果你不想要C端這些元件，直接在你引物里加一個(gè)終止子就可以了，如果你想保留GUS那么引物里就不用帶終止子的引物和GUS共用一個(gè)終止子，這樣表達(dá)的蛋白里就有GUS這個(gè)結(jié)構(gòu)域。 |
5樓2013-12-24 23:40:15
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