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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 構建重組載體
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淺笑包包新蟲 (小有名氣)
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[求助]
構建重組載體 已有2人參與
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| 要構建過表達載體，把一段目的基因插在載體中間，但是老師說酶切位點后面有GUS基因，所以不能把目的基因的終止子放在引物里，否則后面的基因就不能表達了，我就不懂了，請問不是每個編碼蛋白質的序列都有自己的起始密碼子和終止密碼子嗎？為什么插入片段的終止子會影響載體里其它基因的表達？？ |
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luwei13566
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
★ ★
gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流！ 2013-12-25 00:01:21
gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流！ 2013-12-25 00:01:21
| 這就是為什么咱們異元表達后的蛋白都叫重組蛋白。實際上就是你的目的片段序列和一系列小的元件（HIS標簽、用于分子雜交的抗原、GFP標簽一類）融合表達的產(chǎn)物，就像你說的GUS在重組蛋白里就是一個有功能的結構域~~，整個重組蛋白的表達只需要一個啟動子，一個終止子。對這些小元件的取舍完全在于你終止子的位置，如果你不想要C端這些元件，直接在你引物里加一個終止子就可以了，如果你想保留GUS那么引物里就不用帶終止子的引物和GUS共用一個終止子，這樣表達的蛋白里就有GUS這個結構域。 |
5樓2013-12-24 23:40:15
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
淺笑包包(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 代發(fā)~ 感謝應助！ 2013-10-31 23:52:06
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淺笑包包(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 代發(fā)~ 感謝應助！ 2013-10-31 23:52:06
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這個問題要看你的質粒的種類了。通讀質粒圖譜可以知道的。 說一個我做帶GFP標簽的的作為例子，如果GFP是在你的蛋白后融合表達到一起的，那么這個GFP在是沒有起始密碼的，其起始密碼子就是你目的蛋白的起始密碼。同時你的目的蛋白也不能有終止密碼，否者在GFP表達之前就終止表達不出來了。而融合蛋白最終是用GFP的終止密碼作為終止密碼的。但如果GFP自帶起始密碼，目的蛋白和GFP不融合，那你的目的蛋白就要帶上最終密碼的。 呵呵 |
2樓2013-10-28 16:11:49
4樓2013-12-24 19:00:50
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