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TLR7的蛋白表達(dá)
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各位前輩，小輩最近在做小鼠肺組織的TLR7（140kd）的蛋白表達(dá)，上樣量試過(guò)40微克，因?yàn)樵?40kd的位置沒(méi)有出現(xiàn)條帶，因此加大上樣量80微克，用的是10%的分離膠，4%濃縮膠，電泳：濃縮膠80V45min，分離膠120V2h，轉(zhuǎn)膜：300ma2.5h，在冰盒中進(jìn)行，脫脂牛奶封閉：2h，一抗4度過(guò)夜1:500,1:1000，1:1500,1:2000，均試過(guò)，二抗1:20000，都沒(méi)有在140kd的位置出現(xiàn)條帶，在50,100kd有出現(xiàn)條帶，說(shuō)明書(shū)上也在50,100kd標(biāo)有條帶，用的是CST的抗體，是兔多克隆抗體，請(qǐng)問(wèn)各位前輩是什么原因?qū)е?40kd的位置沒(méi)有出現(xiàn)條帶，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢粍俑屑�！圖中最左邊是marker，第一條條帶是170kd,第二條130kd,第三條100kd,第四條70kd,第五條55kd,第六條40kd TLR7.jpg 合并m.jpg 合并marker.jpg |
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南川2013
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-06-11 19:54:25
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| 樓主能測(cè)出來(lái)嗎？我現(xiàn)在也遇到跟您一樣的情況，TLR7 怎么這么難測(cè)？我養(yǎng)的 是THP-1細(xì)胞，沒(méi)見(jiàn)到140kDa的條帶，卻在70多kDa處出現(xiàn)了條帶（內(nèi)參很好），調(diào)整一抗、二抗?jié)舛冗�是沒(méi)有，但是293T的陽(yáng)性對(duì)照就出現(xiàn)了140kDa的條帶，現(xiàn)在真心不知道什么情況了，麻煩樓主指點(diǎn)一二， 不甚感激��！ |
2樓2014-06-11 17:13:33
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