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外源蛋白在畢赤酵母中不表達(dá)
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| 有哪位熱心的戰(zhàn)友給提示一下，我的外源蛋白在畢赤酵母中不表達(dá)，實驗室同期做得都有表達(dá)，說明系統(tǒng)沒有問題，但我的為什么沒表達(dá)？有么有實戰(zhàn)經(jīng)驗，一般這種情況先從哪方面試比較靠譜？ |
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8樓2013-11-05 11:42:14
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【答案】應(yīng)助回帖
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runying36: 金幣+1, ★有幫助, 做了WB沒檢測到信號 2013-11-05 01:02:21
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不表達(dá)還是表達(dá)量低，有沒有做WB檢測下； 如果是不表達(dá)：考慮目的基因有沒有啟動子；再就是考慮重組轉(zhuǎn)化的問題了。 如果表達(dá)量低：可能是基因序列不適合畢赤酵母表達(dá)體系，可以考慮優(yōu)化密碼子； 或者體內(nèi)體外構(gòu)建多拷貝增加表達(dá)量，發(fā)酵條件的篩選也可以嘗試 |
2樓2013-11-04 21:48:47
anyaxiong
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【答案】應(yīng)助回帖
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runying36: 金幣+1, ★有幫助, 做了WB沒檢測到信號，這樣不知道優(yōu)化這些方面會不會有實質(zhì)性改變 2013-11-05 01:03:05
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| 酵母表達(dá)影響因素很多：比較重要的考慮甲醇的量，誘導(dǎo)溫度，誘導(dǎo)時間，接種量和酸堿度等，還有就是你的蛋白可能表達(dá)了，只是檢測方法不當(dāng)也不無可能，有標(biāo)簽的蛋白建議做WB；還有酵母表達(dá)有糖基化修飾，會導(dǎo)致實際蛋白大小比理論值要大一些。 |
3樓2013-11-04 21:50:49
anyaxiong
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4樓2013-11-04 21:52:36
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