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cavalier_sun新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求高手回答G418篩選濃度梯度實(shí)驗(yàn)問題
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這類細(xì)胞實(shí)驗(yàn)做的不多，所以我想來請(qǐng)教用過G418做篩選的戰(zhàn)友： 我用的是Huh-7細(xì)胞系，在一瓶T25中養(yǎng)到大約80%匯合度后轉(zhuǎn)6孔板，24小時(shí)繼續(xù)培養(yǎng)后換含G418梯度的培養(yǎng)基，選的濃度是400,500，600,700,800,900 ug/mL的濃度。我用的G418是Sigma （G8168）G418 disulfide 50mg/mL的水溶液，直接按最終濃度按比例往6孔板中（2ml培養(yǎng)基）加。 文獻(xiàn)中提到的Huh-7篩選濃度大約是700ug/mL，但是我的細(xì)胞在第三天準(zhǔn)備換液的時(shí)候發(fā)現(xiàn)全死了，全浮起來了。 有一個(gè)現(xiàn)象，不知道和這個(gè)篩選濃度梯度實(shí)驗(yàn)失敗是否有關(guān)，就是我Huh-7細(xì)胞長得很快，沒記錯(cuò)的話，兩三天就可以長滿，按G418濃度篩選的正規(guī)流程，好像要等加藥后第十天細(xì)胞死亡才能確定濃度，不知道是不是長得太快導(dǎo)致細(xì)胞死亡？但是平行的一個(gè)T25瓶就算長滿了細(xì)胞還是貼壁的。 不知道哪里有做錯(cuò)的地方，希望大家指正。細(xì)胞是不是要先多傳個(gè)幾代，再進(jìn)行這種實(shí)驗(yàn)？ 謝謝！ |
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豬豬寶寶0209
新蟲 (初入文壇)
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3樓2016-03-23 15:22:47
2樓2014-05-21 17:14:04
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