幸福小草

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[求助] SDS-PAGE上樣量和條帶深淺

請教下SDS-PAGE上樣量一樣為何條帶會有深淺（提取蛋白的溶液組分不一樣，尿素提取得到的蛋白質(zhì)電泳上淺，sds提取的顏色深）

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1樓 2013-11-12 21:31:42

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同東中郎將

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2樓2013-11-12 22:52:37

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cloudrosy

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尿素和 SDS 對同一種定量方法的干擾程度也可能是原因，導(dǎo)致實際濃度和上樣量不一樣。尿素提取蛋白不能用BCA法測濃度。

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3樓2013-11-14 15:54:20

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幸福小草

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3樓: Originally posted by cloudrosy at 2013-11-14 15:54:20
尿素和 SDS 對同一種定量方法的干擾程度也可能是原因，導(dǎo)致實際濃度和上樣量不一樣。尿素提取蛋白不能用BCA法測濃度。

用的考馬斯亮藍測的濃度，如果上樣量一樣的話，那對應(yīng)的條帶的深淺應(yīng)該是一樣的吧？

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4樓2013-11-14 18:49:01

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2樓: Originally posted by 同東中郎將 at 2013-11-12 22:52:37
這個很正常啊，你的是膜蛋白吧？？？

不是膜蛋白，可是上樣量是一樣的啊。

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5樓2013-11-14 18:53:23

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5樓: Originally posted by 幸福小草 at 2013-11-14 18:53:23
不是膜蛋白，可是上樣量是一樣的啊。...

1,測的是總蛋白的濃度。
2，SDS溶解你的蛋白更徹底，尿素沒有完全溶解你的目的蛋白。
3，一般測蛋白方法都有局限性和偏差。
4，那你是做包涵體了，不然用不到尿素的吧。

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6樓2013-11-14 20:03:04

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【答案】應(yīng)助回帖

可以用Qubit儀器專業(yè)的測蛋白的試劑，測一下蛋白含量，調(diào)整上樣，跑出來的就會好很多�；蛘哂肂CA的的定量試劑盒，但誤差較大

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7樓2013-11-19 13:30:57

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louisa俊

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【答案】應(yīng)助回帖

我們用的是改良的LORROY法測蛋白濃度

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8樓2013-11-19 15:00:45

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8樓: Originally posted by louisa俊 at 2013-11-19 15:00:45
我們用的是改良的LORROY法測蛋白濃度

你們用過考馬斯亮藍測濃度嗎？會存在標(biāo)準(zhǔn)曲線不準(zhǔn)確的情況嗎？

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9樓2013-12-03 08:36:52

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