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zr1140861173鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
目的基因與載體連接問題
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| 我PCR的目的基因4600bp,想直接去連接載體pPIC3.5k(大概9000bp),按照正常的連接過程一直都連接不上,各位有誰做過類似的實(shí)驗(yàn)嗎,求幫助。。。。。! |
實(shí)驗(yàn)交流 |

鐵蟲 (初入文壇)
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不知道樓主的問題解決了沒有,這個(gè)我經(jīng)驗(yàn)比較多,樓主可以參考下 無論大小片段連接,最重要的就是片段濃度和純度。 如果PCR片段的雜帶不是太多,建議不要切膠,直接將pcr產(chǎn)物過純化kit,酶切,再直接連接;載體也是一樣,如果低拷貝的質(zhì)粒濃度不高,可以過量酶切之后直接純化,連接。 PCR片段可以適當(dāng)加的比例高一些。 祝你好運(yùn)。 |

新蟲 (初入文壇)
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金蟲 (小有名氣)
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