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lwk5716鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)的問題
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如題，我有一個(gè)疑問，就是我現(xiàn)在有一些轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的序列，但是只是部分序列，還沒有全長(zhǎng)，但是我想QRT-PCR。設(shè)計(jì)引物時(shí)用測(cè)得的序列設(shè)計(jì)，但是總是沒有完美的，有二聚體，有的有錯(cuò)配。擴(kuò)出來效果不好，但是用primer5找不出好的，是不是我的序列只是部分的？還是這段序列沒有符合熒光定量條件要求的引物位點(diǎn)？要是這樣該怎么辦��？ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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4樓2013-11-29 21:40:47
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5樓2013-12-26 16:20:35
| 做熒光定量最好用web primer這是網(wǎng)址：http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer。primer5有個(gè)缺點(diǎn)，不管怎么樣都會(huì)出來引物，而web primer只有付合要求才能設(shè)計(jì)出引物，這樣就要求自己選擇合適的片段來設(shè)計(jì)引物，而這樣設(shè)計(jì)出來的引物表現(xiàn)也是非常出色的~~另外不知道樓主的研究對(duì)象沒有基因組信息，如果有建議進(jìn)行外顯子分區(qū)，然后將引物設(shè)計(jì)成跨外顯子的。 |
6樓2014-06-04 17:01:26
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