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yajune木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
關(guān)于熒光定量PCR基因擴(kuò)增的問題
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| 我試驗(yàn)做的是藥物處理以后，斑馬魚肝臟內(nèi)幾種基因表達(dá)量變化的試驗(yàn)。我選的基因里邊有兩個(gè)功能接近的基因，DHCR7和DHCR24，這兩個(gè)是膽固醇生物合成中的脫氫膽固醇還原酶（7位和24位），兩個(gè)基因的序列是從genebank上查的，然后都是用primer設(shè)計(jì)的引物。然后試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這兩個(gè)基因的結(jié)果有點(diǎn)過于接近，就是他們的表達(dá)量隨藥物處理濃度變化的趨勢(shì)幾乎完全一樣，而其他基因則不會(huì)有這么接近趨勢(shì)。再加上這兩個(gè)基因的功能也一樣，只是位點(diǎn)不同，所以我有點(diǎn)懷疑會(huì)不會(huì)我擴(kuò)出來其實(shí)是一個(gè)基因，就是說我雖然是當(dāng)兩個(gè)基因設(shè)計(jì)的引物，但是由于兩個(gè)基因序列很接近，其實(shí)擴(kuò)增出來的是同一個(gè)基因。我以前沒做過分子的試驗(yàn)，所以不太懂，我想問一下我說的這種情況是否有可能出現(xiàn)。可能性有多大？然后我怎么判斷我擴(kuò)增出來的這兩個(gè)基因是兩種還是一種？ |
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謝謝，我用在primer-blast里邊把我引物的序列輸進(jìn)去了，然后把生物改成了斑馬魚，別的什么都沒調(diào)，直接點(diǎn)了get primer，這個(gè)操作正確么？下邊是DHCR24出來的結(jié)果，這個(gè)結(jié)果能說明引物有特異性么 Sequence (5'->3') Length Tm GC% Self complementarity Self 3' complementarity Forward primer TCAGGTGACTGCTCTGCTCAACTCT 25 65.45 52.00 4.00 0.00 Reverse primer ACCAGACTGCCGTCAGCCAACA 22 66.63 59.09 6.00 1.00 Products on target templates >NM_001008645.1 Danio rerio 24-dehydrocholesterol reductase (dhcr24), mRNA product length = 180 Forward primer 1 TCAGGTGACTGCTCTGCTCAACTCT 25 Template 539 ......................... 563 Reverse primer 1 ACCAGACTGCCGTCAGCCAACA 22 Template 718 ...................... 697 |
3樓2013-05-20 07:49:11
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5樓2013-05-22 12:18:40
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