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yajune木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
關于熒光定量PCR基因擴增的問題
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| 我試驗做的是藥物處理以后，斑馬魚肝臟內(nèi)幾種基因表達量變化的試驗。我選的基因里邊有兩個功能接近的基因，DHCR7和DHCR24，這兩個是膽固醇生物合成中的脫氫膽固醇還原酶（7位和24位），兩個基因的序列是從genebank上查的，然后都是用primer設計的引物。然后試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這兩個基因的結(jié)果有點過于接近，就是他們的表達量隨藥物處理濃度變化的趨勢幾乎完全一樣，而其他基因則不會有這么接近趨勢。再加上這兩個基因的功能也一樣，只是位點不同，所以我有點懷疑會不會我擴出來其實是一個基因，就是說我雖然是當兩個基因設計的引物，但是由于兩個基因序列很接近，其實擴增出來的是同一個基因。我以前沒做過分子的試驗，所以不太懂，我想問一下我說的這種情況是否有可能出現(xiàn)�？赡苄杂卸啻�？然后我怎么判斷我擴增出來的這兩個基因是兩種還是一種？ |
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2樓2013-05-19 23:00:32
yajune
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謝謝，我用在primer-blast里邊把我引物的序列輸進去了，然后把生物改成了斑馬魚，別的什么都沒調(diào)，直接點了get primer，這個操作正確么？下邊是DHCR24出來的結(jié)果，這個結(jié)果能說明引物有特異性么 Sequence (5'->3') Length Tm GC% Self complementarity Self 3' complementarity Forward primer TCAGGTGACTGCTCTGCTCAACTCT 25 65.45 52.00 4.00 0.00 Reverse primer ACCAGACTGCCGTCAGCCAACA 22 66.63 59.09 6.00 1.00 Products on target templates >NM_001008645.1 Danio rerio 24-dehydrocholesterol reductase (dhcr24), mRNA product length = 180 Forward primer 1 TCAGGTGACTGCTCTGCTCAACTCT 25 Template 539 ......................... 563 Reverse primer 1 ACCAGACTGCCGTCAGCCAACA 22 Template 718 ...................... 697 |
3樓2013-05-20 07:49:11
4樓2013-05-20 19:33:53
yajune
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5樓2013-05-22 12:18:40
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6樓2013-05-23 13:45:09
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